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结核分枝杆菌EsxV脂质体纳米颗粒亚单位疫苗的制备及免疫学特性
编辑人员丨2024/3/30
本研究旨在制备脂质体纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNP)为载体的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原EsxV亚单位疫苗,明确该疫苗经黏膜免疫诱导的免疫应答水平.采用薄膜分散法制备包裹蛋白EsxV和c-di-AMP的LNP(EsxV:C:L),并对其包封率、LNP形态、粒径、表位电荷及多相分散指数进行了检测.EsxV:C:L滴鼻免疫 BALB/c小鼠,检测免疫后血清和黏膜抗体、肺或脾细胞因子转录及分泌水平、肺 T 细胞亚群细胞比例.结果成功获得大小均一、呈球状、带负电的EsxV:C:L LNP亚单位疫苗.与EsxV:C相比,EsxV:C:L鼻黏膜接种可诱导小鼠呼吸道黏膜 sIgA水平增加,脾细胞因子 IL-2 分泌水平升高,提高中央记忆 T 细和组织驻留T细胞的比例.综上,EsxV:C:L经黏膜免疫,可诱导更强的黏膜免疫和记忆性T细胞免疫应答,可能提供更好的抗Mtb感染的保护作用.
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编辑人员丨2024/3/30
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结核分枝杆菌EsxV亚单位疫苗黏膜免疫诱导的免疫应答
编辑人员丨2023/8/5
目的 研究结核分枝杆菌抗原Rv3619c(EsxV)黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答水平.方法 PCR法扩增eszV基因克隆入原核表达载体pET28a(+),获得的重组E.coli诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定蛋白的表达,亲和层析法纯化EsxV蛋白.以EsxV和/或联合环二腺苷酸(c-di-AMP)经鼻黏膜免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠特异性抗体水平及亚类,MTS法检测脾细胞增殖,qRT-PCR检测脾和肺脏细胞因子表达水平,ELISA法检测脾细胞因子分泌水平.结果 成功构建EsxV的原核表达载体pET28a(+)-eszV并诱导表达目的蛋白,亲和层析法获得了纯化的重组Es-xV 蛋白.EsxV经黏膜免疫可诱导显著的体液免疫应答,但诱导的细胞免疫应答水平不高.EsxV与c-di-AMP经黏膜接种可诱导特异性IgG水平增加,EsxV蛋白特异的脾细胞增殖,脾和肺细胞的IFN-y转录增加.c-di-AMP显著提高EsxV特异的IFN-y、IL-2、IL-10和IL-17细胞因子分泌,而不诱导炎症因子TNF-α和IL-6表达.结论 EsxV与c-di-AMP佐剂构建的亚单位疫苗可诱导特异性体液和细胞免疫应答,可进一步用于新型结核病亚单位疫苗的研制.
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编辑人员丨2023/8/5
