目的:探讨糖肾平对糖尿病肾病(Diabetic Kidney Disease,DKD)KKAy小鼠肾保护作用及其对RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:雌性10周龄SPF级KKAy小鼠60只,KK鼠料诱导10周建立DKD模型,随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平低(0.525 g·kg-1)、中(1.05 g·kg-1)、高(2.1 g·kg-1)剂量组,10只雌性C57BL/6J小鼠为正常组.各治疗组灌胃给药,正常组、模型组灌胃等体积去离子水,每4周称体质量并测24 h尿蛋白定量.第26周小鼠麻醉后摘眼球取血,称肾质量、测空腹血糖(Fasting Blood Glucose,FBG)、血尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)和甘油三酯(Triglyceride,TG)含量;HE、Mallory和PAS染色观察肾组织病理;免疫组化、原位杂交测肾组织转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Ras同源基因家族成员A (Ras homolog gene familymember A,RhoA)、Rho相关卷曲蛋白激酶(Rho-assoeiatedcoiledcoi1-containing protein kinase 1,ROCK1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)、E-钙黏素(E-Cadherin,E-Cad)mRNA及蛋白表达.结果:与模型组相比,各治疗组体质量、肾质量/体质量、尿蛋白降低,糖肾平中、高剂量组有显著性差异(P＜0.01);肾病理损害明显减轻,FBG、BUN、Scr、TG含量降低(P＜0.01),E-Cadherin mRNA及蛋白表达增加,TGF-β1、RhoA、ROCK1和α-SMA mRNA和蛋白表达减少,糖肾平中、高剂量组差异显著(P＜0.01).结论:糖肾平对DKD KKAy小鼠肾的保护作用及抑制肾小管上皮细胞转分化的作用,可能与调节RhoA/ROCK信号通路有关.

目的:探讨糖肾平含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:制备鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:正常组,高糖组,抑制剂(Y27632)组,厄贝沙坦组,糖肾平低、中、高剂量组,3000细胞/孔种于96孔板,每组8个复孔,12、24、48、60 h观察细胞,MTT法检测细胞增殖.Western blotting检测肾小管上皮细胞中RhoA、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达.结果:高糖诱导后细胞呈梭型或不规则三角形;含药血清干预后,细胞呈扁平不规则多角形.MTT:12 h,与正常组比,各组OD值升高;24、48、60 h,与正常组比,高糖组OD值显著升高(P＜0.01);与高糖组比,各治疗组OD值有不同程度降低(P＜0.05),48 h,与Y27632组、厄贝沙坦组和糖肾平高剂量组比,糖肾平低、中剂量组OD值降低(P＜0.05);60 h,与Y27632组比,糖肾平中剂量组降低;与厄贝沙坦组比,糖肾平各剂量组OD值降低(P＜0.05);与糖肾平高剂量组比,糖肾平低剂量组升高(P＜0.05).Western blotting,与正常组比,高糖组E-Cadherin蛋白表达减少,RhoA、ROCK1和α-SMA蛋白表达增加(P＜0.01);与高糖组比,各组E-Cadhenn蛋白表达增加,RhoA、ROCK1和α-SMA蛋白表达减少,高剂量组有显著差异(P＜0.01);与Y27632组比,糖肾平高剂量组ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P＞0.05),RhoA蛋白表达减少(P＜0.01);与厄贝沙坦组比,糖肾平高剂量组RhoA、ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P＞0.05).结论:糖肾平通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和RhoA/ROCK信号通路相关分子的表达,从而逆转上皮-间质转分化,抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展.

目的:探讨糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:10％ FBS的RPMI 1640培养细胞,培养细胞分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和糖肾宁组,按每孔3000个细胞接种于96孔板中.每组8个复孔,加入6％的各组合药血清培养,分别于12、24、48、60h观察细胞形态并应用MTT法检测细胞增殖情况;Western blotting检测RhoA、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达.结果:正常组细胞呈扁平不规则多角形,高糖刺激下,细胞呈梭型,加入含药血清后呈扁平不规则多角形.MTT:24、48 h,正常组与模型组比较,有极显著性差异(P＜0.01),60 h,正常组与模型组比较,有显著性差异(P＜0.05);24 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组比较,有显著性差异(P＜0.05);48 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有极显著性差异(P＜0.01);60 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有显著性差异(P＜0.05).Western blotting:正常组与模型组、Y27632组比较RhoA蛋白表达减少,有极显著性差异(P＜0.01);糖肾宁组与模型组比较,有极显著性差异(P＜0.01);糖肾宁组与Y27632组比较,有显著性差异(P＜0.05).正常组与模型组比较ROCK1蛋白表达减少,有极显著性差异(P＜0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P＜0.05).正常组与模型组比较α-SMA蛋白表达减少,有极显著性差异(P＜0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P＜0.05).正常组与模型组组比较E-Cadherin蛋白表达增加,有显著性差异(P＜0.05);Y27632组与糖肾宁组比较,有显著性差异(P＜0.05);模型组与Y27632组、各治疗组比较,有显著性差异(P＜0.05).结论:糖肾宁可抑制高糖培养肾小管上皮细胞增殖和RhoA/ROCK信号通路相关分子的表达,逆转肾小管上皮细胞转分化、减轻肾间质纤维化、延缓DKD进程.