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谷氨酰胺对甲状腺癌细胞恶性生物学行为及SNX10/mTORC1通路相关蛋白表达的影响
编辑人员丨3周前
目的:探究谷氨酰胺(Gln)对甲状腺癌细胞恶性生物学行为及SNX10/mTORC1通路蛋白表达的影响.方法:分别用含0、1、2、4 mmol/L Gln的培养基培养人未分化甲状腺癌细胞系C643,每个浓度设6个复孔.分组培养24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖活性.分组培养24 h后,采用Annexin V/PI双染法、划痕实验、Transwell小室实验、三磷酸腺苷(ATP)实验检测细胞凋亡率、迁移能力、侵袭能力、ATP生成能力,采用实时荧光定量PCR法检测 SNX10、p-mTOR、mTORC1 mRNA 的表达,Western blot 法检测 SNX10、p-mTOR、mTORC1、Akt、p-Akt 蛋白的表达.结果:Gln干预后,C643细胞凋亡率下降,增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数、ATP浓度均增加,SNX10、p-mTOR、mTORC1 mRNA相对表达量升高,SNX10、p-mTOR、mTORC1、Akt、p-Akt蛋白表达上调,且均呈剂量依赖性(P＜0.05).结论:Gln可能通过激活SNX10/mTORC1通路而促进甲状腺癌细胞的恶性生物学行为.
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编辑人员丨3周前
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α-常春藤皂苷调控SNX10介导的谷氨酰胺代谢抑制肠上皮细胞恶性转化研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 研究干扰分选连接蛋白10(sorting nexin 10,SNX10)表达对人正常肠上皮FHC、NCM460细胞增殖、谷氨酰胺代谢的影响及α-常春藤皂苷调控作用的分子机制.方法 利用转染技术构建稳定敲低SNX10的FHC、NCM460细胞,qRT-PCR和Western blotting检测敲低效率;CCK-8、克隆形成实验检测细胞增殖能力;MTT筛选α-常春藤皂苷实验浓度并检测其对SNX10表达的影响;检测细胞内还原型谷胱甘肽含量;Western blotting检测细胞SNX10、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC 1)/c-myc信号通路相关蛋白及下游谷氨酰胺转运蛋白SLC7A5表达情况.结果 敲低SNX10后FHC、NCM460细胞增殖异常加快(P＜0.01),细胞内还原型谷胱甘肽含量异常升高(P＜0.01),mTORC1/c-myc通路被激活,下游SLC7A5表达升高;而α-常春藤皂苷干预SNX10敲低细胞系后,细胞SNX10表达升高(P＜0.05、0.01),且上述变化发生逆转并渐趋空载细胞水平.结论 SNX10有望成为结直肠癌临床诊断及防治的新靶点,α-常春藤皂苷可逆转肠上皮细胞因SNX10敲低导致的快速增殖、mTORC1/c-myc信号通路活化及谷氨酰胺代谢的异常升高,从而抑制正常肠上皮细胞的恶性转化.
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编辑人员丨2023/8/5
