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过表达ULK3介导GLi1对人膀胱癌细增殖、迁移、侵袭的影响及机制
编辑人员丨1天前
目的:探讨过表达Un51样激酶3（ULK3）介导胶质瘤相关癌基因同源基因1（Gli1）对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法:培养人膀胱癌T24细胞分为对照组、ULK3过表达组（ULK3+组）、Gli1过表达组（Gli1+组）、ULK3和Gli1过表达组（ULK3+/Gli1+组）、ULK3过表达和Gli1敲低组（ULK3+/Gli1-组），分别使用阴性对照试剂、过表达ULK3质粒、过表达Gli1质粒、shRNA敲低Gli1质粒对相应各组进行细胞转染 。收集转染后的各组细胞，采用细胞计数试剂盒（CCK）-8检测细胞的增殖能力，划痕实验检测细胞运动能力，Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力，Western blotting检测LC3A/B、P62蛋白表达情况，荧光蛋白标记技术检测自噬小体LC3B蛋白表达情况。 结果:（1）对照组、ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞培养0 h时OD值差异无统计学意义（ P=1.000），培养24、48、72 h时，ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组的OD值均大于对照组，差异均有统计学意义（ F=60.98、56.53、112.70， P值均<0.001）。（2）对照组、Gli1+组、ULK3+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞迁移数分别为（292.3±28.5）、（376.7±8.1）、（365.7±8.1）、（505.7±22.4）、（301.3±26.7）个，细胞侵袭数分别为（127.7±10.0、（185.0±11.5）、（191.3±8.0）、（278.3±11.0）、（128.7±4.0）个，24 h细胞迁移率分别为8.8%±0.2%、18.8%±0.3%、18.8%±0.4%、24.6%±0.4%、13.8%±0.3%，48 h细胞迁移率分别为14.9%±0.3%、30.3%±2.1%、29.8%±1.6%、50.1%±3.7%、24.9%±1.7%。ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞迁移、侵袭数目，以及24、48 h细胞迁移率均大于对照组，差异均有统计学意义（ F=50.82、126.80、112.20、106.70， P值均<0.001）。（3）对照组、Gli1+组、ULK3+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞LC3A/B蛋白相对表达量分别是0.18±0.01、0.41±0.02、0.41±0.03、0.63±0.03、0.25±0.03，P62蛋白相对表达量分别为1.06±0.07、0.88±0.01、0.87±0.02、0.53±0.02、0.98±0.04；ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组LC3A/B蛋白的相对表达量均高于对照组，P62蛋白的相对表达量均低于对照组，差异均有统计学意义（ F=152.80、72.48， P值均<0.001）。（4）ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组自噬小体LC3蛋白荧光表达量均多于对照组。 结论:过表达ULK3可以增强人膀胱癌T24细胞增殖、迁移及侵袭能力，其机制可能是通过介导Gli1诱导了细胞自噬反应的增强。
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编辑人员丨1天前
