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lncHAGLR通过抑制miR-26a激活NF-κB促进骨关节炎大鼠软骨细胞的炎症反应和细胞凋亡
编辑人员丨2024/4/27
目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HOXD反义生长相关长链非编码RNA(HOXD antisense growth-associated long non-coding RNA,lncHAGLR)对大鼠膝关节退行性软骨细胞C518 细胞的炎症反应和凋亡的作用与潜在机制.方法 采用StarBase和荧光素酶报告基因法预测和确认ln-cHAGLR和微小RNA(microRNA,miR)-26a之间的相互作用.为研究lncHAGLR对miR-26a表达的调控作用,将C518 细胞分为沉默lncHAGLR的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)载体质粒(si-ln-cHAGLR)组、siRNA的阴性对照(negative control of siRNA,si-NC)组、miR-26a抑制剂阴性对照(nega-tive control of miR-26a inhibitor,inhibitor-NC)组、miR-26a的抑制剂(miR-26a-inhibitor)组.此外,为研究lncHAGLR是否通过调控miR-26a对C518 细胞的炎症和凋亡具有调控作用,将C518 细胞分为5 组:Control组、白细胞介素(interleukin,IL)-1β 组、IL-1β + si-NC 组、IL-1β + si-lncHAGLR 组和 IL-1β + si-lncHA-GLR +miR-26a-inhibitor组.采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析 lncHAGLR和miR-26a的水平.采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)、乳酸脱氢酶(lactate dehydro-genase,LDH)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测C518 细胞的增殖、细胞毒性和凋亡情况.蛋白质印迹检测切割模式的半胱天冬酶3(CLEAVED-CASPASE3)、核因子κB P65(nuclear factor-κB P65,NF-κB P65)、磷酸化的NF-κB P65(phosphorylated NF-κB P65,P-NF-κB P65)的表达.ELISA法检测白细胞介素(interleukin,IL)-6 和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的释放.结果 lncHAGLR直接靶向miR-26a.在IL-1β组,lncHAGLR 水平明显较 Control 组增高,miR-26a 水平较 Control 组降低(P均<0.05).此外,IL-1β +si-lncHAGLR组减轻了IL-1β诱导的C518 细胞的炎症并抑制了凋亡,而且细胞的活力增加,LDH释放减少,CLEAVED-CASPASE3 的表达被抑制,TNF-α和IL-6 的分泌减少,且p-NF-κB P65表达减少(P均<0.05).IL-1β+ si-lncHAGLR + miR-26a-inhibitor组逆转了 IL-1β + si-lncHAGLR 组的结果(P均<0.05).结论 lncHAGLR通过抑制miR-26a激活NF-κB促进C518 细胞的炎症反应和细胞凋亡,表明lncHAGLR可能是治疗骨关节炎的一个有价值的靶点.
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编辑人员丨2024/4/27
