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线性质粒pBSSB1 LP002基因缺陷对伤寒沙门菌致病性的影响
编辑人员丨3周前
目的 构建伤寒沙门菌线性质粒pBSSB1 LP002基因缺陷株(△LP002),探讨LP002基因在伤寒沙门菌致病中的作用.方法 采用自杀质粒介导的同源重组法制备伤寒沙门菌△LP002.2种菌株分别培养12 h,每隔1 h应用分光光度计检测波长600 nm处吸光度(OD600)值并绘制生长曲线,采用实时荧光定量PCR法检测野生株培养至OD600=0.2、0.4、0.6、0.8、1.2、1.8时LP002 mRNA相对表达量,并选择合适生长期的△LP002和伤寒沙门菌野生株进行表型实验:采用细菌动力实验检测动力圈直径,采用生物膜形成实验检测生物膜形成量;氨苄西林、庆大霉素处理后检测活菌菌落数并绘制生存曲线,观察有无滞留菌形成,计算抗生素处理5 h时滞留率、抑菌圈直径;检测对HeLa细胞的侵袭能力及在巨噬细胞内存活能力,计算侵袭指数、增殖指数.结果 经PCR筛选验证,野生株基因组扩增产物长度为1 450 bp,△LP002基因组扩增产物长度为888 bp,敲除长度为562 bp,表明△LP002制备成功.培养1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12 h 时,△LP002 OD600值与野生株比较差异均无统计学意义(t=1.385、1.576、1.895、0.351、0.833、0.195、0.213、0.926、0.024、0.011、0.116、0.063,P 均＞0.05).△LP002 动力圈直径[(35.67±1.15)mm]、生物膜形成量(0.29±0.04)与野生株[(35.00±1.00)mm、0.36±0.04]比较差异均无统计学意义(t=0.756,P=0.492;t=2.196,P=0.093).生存曲线显示,△LP002、野生株均存在滞留现象;△LP002经氨苄西林、庆大霉素处理5 h时滞留率[(0.300±0.200)％、(0.022±0.022)％]与野生株[(0.513±0.252)％、(0.063±0.044)％]比较差异均无统计学意义(t=1.143,P=0.317;t=1.464,P=0.217).经氨苄西林、庆大霉素处理前、后△LP002与野生株抑菌圈直径比较差异均无统计学意义(P＞0.05);△LP002、野生株经氨苄西林、庆大霉素处理后抑菌圈直径与处理前比较差异均无统计学意义(P＞0.05).△LP002 侵袭指数[(28.65±4.73)％]、增殖指数(1.10±0.17)均低于野生株[(41.35±3.59)％、2.63±0.18](t=5.230,P＜0.001;t=15.550,P＜0.001).结论 LP002基因缺陷可抑制伤寒沙门菌对HeLa细胞的侵袭能力及在巨噬细胞内存活能力,但不影响细菌生长速度、动力、生物膜形成能力、滞留菌形成能力及对氨苄西林和庆大霉素的敏感性.
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编辑人员丨3周前
