目的 Rv1973是人型结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mt)RD区(region of differences)基因表达的一个外膜蛋白(OMP),其功能尚不明确.分枝杆菌和革兰氏阴性菌的外膜结构与其毒力、耐药性等常密切相关.本研究拟构建Mt-Rv1973及其耻垢分枝杆菌(M.smegmatis,Ms)同源基因MSMEG_0353(Ms-Rv1973)重组表达载体并建立其异源性表达的菌株,用于目的蛋白的诱导表达及其生物学功能的相关研究.方法 将密码子优化的Mt-Rv1973与Ms-Rv1973的编码序列重组入pMAL-c6T载体并转化入低内毒素的ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌中获得异源性Mt-Rv1973与Ms-Rv1973融合表达菌株,并通过对目的蛋白进行诱导表达、SDS-PAGE分析和液相色谱-质谱(LC-MS)鉴定、Ni2+亲和层析和标签切割等获得纯化的目的蛋白.结果 成功构建了Mt-Rv1973与Ms-Rv1973表达载体和异源性表达菌株,并经诱导表达和纯化获得了目的蛋白.结论 为研究该蛋白的功能奠定了基础.
作者：王晓彤；李飞娜；陈豪；申晨
来源：标记免疫分析与临床 2022 年 29卷 12期
