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目的：构建结核分枝杆菌去乙酰化酶2（Sir2）原核表达载体，并进行表达纯化及酶学研究。方法以结核分枝杆菌 H37Rv 基因组 DNA 为模板，聚合酶链反应扩增 Sir2基因，构建 pET‐28a‐Sir2重组质粒，在 E ．coli BL2（DE3）中诱导表达蛋白，经 Ni2＋‐NTA 柱纯化，最后通过去乙酰化酶试验测定 Sir2酶活的最适反应温度和 pH值，以及吡嗪酰胺对其酶活的影响。结果成功构建了 Sirt2原核表达载体，并能在 E ．coli BL21（DE3）中高效表达。随后对纯化的 Sir2蛋白进行依赖于 NAD ＋的去乙酰化活性研究，得到该酶的最适反应温度是25℃，最适反应pH 值是9．0。在偏酸性环境中，吡嗪酰胺对酶活有抑制，而在偏碱性环境中，没有抑制作用。结论利用分子克隆技术，获得了高纯度的 Sir2蛋白并获得其酶活最适反应温度和最适 pH 值，及吡嗪酰胺对其有抑制效果，为研究抗结核药物吡嗪酰胺的抑菌机制提供一定基础。
作者：林雅宁；董剑；徐忠玉
来源：检验医学与临床 2015 年 18期
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