缺氧环境下shRNA下调MTDH基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响-临床诊疗知识库

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作者：

徐龙；苏冰；杜成；韩涛；刘兆喆；谢晓冬

来源：

临床误诊误治 2016 年 29卷 1期

标签：

转移黏附基因乳腺肿瘤缺氧诱导因子1,α亚基细胞增殖细胞凋亡 MTDH Breast neoplasm Hypoxia-Inducible factor 1,alpha subunit Cell proliferation Apoptosis

目的探讨缺氧环境下MTDH表达下调对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响.方法 ①利用二氯化钴模拟缺氧环境,采用RT-PCR及Western blot法检测HIF-1α及MTDH基因在缺氧环境下表达水平的改变;②缺氧环境下将加入MTDH-shRNA转染质粒的MCF-7细胞(缺氧MTDH-shRNA组)、control-shRNA转染质粒的MCF-7细胞(缺氧Control-shRNA组)及仅予单纯二氯化钴缺氧处理的MCF-7细胞(单纯缺氧组)分别转染,24 h后观察转染率,再应用RT-PCR及Western blot法检测MTDH基因在mRNA和蛋白水平上的变化;③MTT实验检测下调MTDH基因表达对单纯缺氧组、缺氧Control-shRNA组和缺氧MTDH-shRNA组MCF-7细胞增殖的影响,并采用Hoechst33258染色及流式细胞术检测3组细胞的凋亡情况;④采用RT-PCR及Western blot法观察下调MTDH基因对单纯缺氧组、缺氧Control-shRNA组和缺氧MTDH-shRNA组HIF-1α表达的影响.结果 ①缺氧环境下MCF-7细胞HIF-1α基因表达无变化,HIF-1α蛋白表达在一定范围内随缺氧时间延长而升高(P＜0.05),MTDH基因及蛋白表达随缺氧时间延长均逐渐升高(P＜0.05);②MCF-7细胞转染率约60％,与单纯缺氧组和缺氧Control-shRNA组相比,缺氧MTDH-shRNA组MTDH基因及蛋白表达均减低(P＜0.05);③下调MTDH基因表达后,与单纯缺氧组及缺氧Control-shRNA

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