将结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis, Mtb) 多个B细胞预测表位串联表达 (命名为B102) , 并初步评价其作为诊断抗原的血清学诊断价值.将MtbPstS1、ESAT6、CFP10、Ag85B、Ag85A及PPE54等6个蛋白的11个B细胞预测表位串联, 加入合适的连接臂后全基因合成;将多表位片段插入带有TRX标签的表达质粒中, 在大肠杆菌BL21 (DE3) 中诱导表达, 并利用Ni2+-Chelating亲和层析和DEAE阴离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blotting (WB) 技术对目的蛋白抗原性进行鉴定, 并建立Mtb抗体检测竞争法ELISA技术, 初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.目的蛋白以包涵体形式存在, 其表达量约占菌体总蛋白的31.25％, 经纯化及复性后蛋白B102可溶性存在, 浓度为3.124mg/mL, 纯度为96.71％;WB实验表明目的蛋白能与Mtb阳性血清相应抗体发生反应.对60份Mtb阳性血清及60份Mtb阴性血清进行检测得出其灵敏度为90.00％, 特异性为93.33％, 阳性预测值为93.10％, 阴性预测值为90.32％, 符合率为91.67％, McNemer检验的结果提示与"金标准"诊断结果无差异, Kappa=0.833, 提示两种方法诊断结果一致性优异.原核表达与层析纯化可以获取抗原性优异的Mtb多表位诊断抗原, 作为诊断抗原可以应用于Mtb的血清学检测中.
作者：高健；赵鼎
来源：生物工程学报 2019 年 35卷 4期
