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旨在原核表达Pokemon基因的锌指结构域，纯化获得GST-Zinc finger的融合蛋白。以人胶质瘤T98G细胞的cDNA为模板，利用PCR扩增带有BamH I和Sal I酶切位点的人Pokemon基因的锌指结构域，然后将其克隆到pGEX-4T-1原核表达载体中。将正确的重组载体转入大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG诱导表达，再利用MagneGST particles亲和纯化Zinc finger融合蛋白，最后通过Western blot鉴定此融合蛋白。结果显示，成功构建pGEX-4T-1-Zinc finger原核表达载体；30℃条件下，0.2 mmol/L的IPTG能诱导出大量的可溶性GST-Zinc finger蛋白；经MagneGST particles纯化的GST-Zinc finger蛋白可被识别Pokemon锌指结构域的抗体特异识别。纯化的GST-Zinc finger蛋白可用于后续的生物学研究。
作者：刘莉；李岳亭；张萌萌；杨予涛；徐志卿
来源：生物技术通报 2015 年 2期
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