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目的:克隆人FasL全长cDNA并构建其真核表达载体.方法:采用RT-PCR法从健康人外周血单核细胞中扩增包含全部阅读框架的FasL全长cDNA,将之与pGEM-T Easy质粒连接、测序.构建pcDNA3.1-FasL真核表达载体,用脂质体介导方法转染人直肠癌8348细胞,检测FasL表达情况.结果:RT-PCR扩增的FasL产物经限制性内切酶酶切后生成的片段符合预期大小.克隆测序证实所得的FasL cDNA序列与Gene Bank序列完全一致.pcDNA3.1-FasL重组质粒经EcoRI+XhoI双酶切后,电泳显示898 bp目的片段和pcDNA3.1载体片段,证明重组质粒正确.转染直肠癌8348细胞后,用RT-PCR方法检测FasL表达阳性.结论:采用RT-PCR方法成功克隆了人FasL全长cDNA并构建了其真核表达载体,为进一步研究FasL功能奠定了基础.
作者：安萍；魏家臣；李世拥；于波；蔡慧芸
来源：外科理论与实践 2003 年 8卷 5期
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