本研究体外克隆了结核分枝杆菌Rv0859基因,融合表达并纯化了Rv0859蛋白.首先提取H37Rv标准菌株中的基因组DNA,设计Rv0859基因两端的引物,以H37Rv基因组DNA为模板通过PCR方法扩增Rv0859基因.用Hind Ⅲ和BamH Ⅰ两种限制性内切酶双切Rv0859基因,T4连接酶连接到pET30载体上,再转入大肠杆菌JF1125中,经过筛选鉴定后抽提质粒测序,得到重组正确载体,转化到表达宿主大肠杆菌BL21中.用IPTG进行诱导表达,通过聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)3L质谱鉴定重组表达蛋白.0.05 mol/L浓度的IPTG 37℃诱导4 h重组蛋白的表达量最高.制备重组蛋白的多克隆抗体,通过亚细胞分离及Western-blotting分析蛋白的亚细胞定位.结果成功地构建原核表达载体pET30a-Rv0859,并获得47845 D左右的大量表达的Rv0859蛋白,Western-blotting结果表明Rv0859蛋白主要定位于细胞膜中,微量存在于细胞壁中,为进一步的Rv0859蛋白功能研究奠定了一定的基础.
作者：刘岩岩；马国举；廖海印；张鹭；王洪海
来源：微生物学通报 2009 年 36卷 1期
