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目的构建编码结核分枝杆菌蛋白Ag85A基因为基础的DNA疫苗.方法采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因组中,扩增出分泌蛋白Ag85A成熟蛋白的编码基因,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体pGEM-T Easy中.经酶切鉴定与序列测定证实后,以亚克隆法构建于真核表达载体pcDNA3.1的相应酶切位点.重组质粒肌注免疫小鼠,4周后用ELISA法检测抗体滴度.结果结核分枝杆菌H37Rv株Ag85A成熟蛋白的编码基因经序列测定证实无突变;经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定证实克隆基因正确插入载体pcDNA3.1.ELISA法检测几何平均滴度为1∶1 000.结论以Ag85A成熟蛋白的编码基因为基础的DNA疫苗的成功构建和表达,为进一步研究其在结核病与肿瘤防治方面的作用奠定了基础.
作者：陈海文；王子明；范雄林；石涛；秦兆寅；贺大林；李元；徐志凯
来源：西安交通大学学报(医学版) 2003 年 24卷 5期
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