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目的 构建结核分枝杆菌蛋白Ag85A/MPT-64融合基因为基础的DNA疫苗,并利用ELISPOT技术检测其免疫原性.方法 利用PCR和基因克隆技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Ag85A/MPT-64编码基因,构建真核表达载体,用酶切和双向DNA测序进行鉴定.鉴定正确的阳性克隆重组质粒,肌注免疫小鼠,3周后用ELISPOT法检测抗体滴度.结果 构建到真核载体中的结核分枝杆菌H37Rv株Ag85A/MPT-64融合基因经序列测定证实无突变.ELISPOT法检测几何平均滴度为1∶1 000.结论 以Ag85A/MPT-64融合基因为基础的DNA疫苗的成功构建和表达以及ELISPOT技术的应用,为进一步研究其在结核病与肿瘤防治方面的作用奠定了基础.
作者：张娟；蒋俊；张红；马龙凤；包洪；于庭
来源：中国实验诊断学 2012 年 16卷 1期
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