目的 神经母细胞瘤是儿童常见的恶性疾病,转移是致死的主要因素,其中微小RNA(microRNA,miRNA)在该疾病的转移中具有很重要的作用.本研究旨在探索miR-195是否通过RET调节神经母细胞瘤细胞的侵袭.方法 在神经母细胞瘤细胞中转染mimics control和miR-195mimics,建立过表达miR-195的细胞模型.通过Transwell侵袭实验研究过表达miR-195对侵袭的影响.利用生物信息学检测miR-195的靶基因,并应用荧光素酶报告基因鉴定其对靶基因3'UTR的结合序列.实时定量PCR及western检测过表达miR-195对靶基因mRNA及蛋白的改变.应用siRNA干扰建立抑制靶基因的细胞模型,通过Transwell侵袭实验检测敲减靶基因对侵袭的影响.最后建立恢复靶基因表达的细胞模型,通过Transwell侵袭实验验证能力的恢复.结果 在SH-SY5Y和SK-N-SH内,均成功过表达miR-195的相对水平分别为34±1.19和43±1.71,与对照组相比具有显著差异(P＜0.001).SH-SY5Y过表达miR-195后发生侵袭的细胞数由93±2降至62±1,SK-N-SH过表达miR-195后发生侵袭的细胞数由82±2降至56±5,过表达miR-195后显著抑制细胞侵袭(P＜0.05);生物信息学检测miR-195能够结合RET mRNA的3 'UTR.过表达miR-195显著抑制RET的mRNA和蛋白质水平(P＜0.05).过表达miR-195显著抑制报告质粒RET 3' UTRWT

作者：朱永洁；陈鑫；韩芦芦；段于河；董蒨

来源：中华小儿外科杂志 2015 年 36卷 10期