目的 基于膀胱癌标志物的早期诊断和术后复发监测方法 是目前的研究热点.文中利用CELL-SELEX技术筛选出可特异性识别膀胱癌细胞系(EJ、T24、BIU87)的核酸适配体.方法 以人膀胱癌细胞系EJ、T24和BIU87为阳性质控细胞,以HCV29(人正常尿路上皮细胞系)、293T(人胚肾细胞系)、huh7(人肝癌细胞系)为阴性质控细胞,进行CELL-SELEX筛选.PCR上游引物5'端标记FITC,下游引物5'端标记Biotin,将每一轮次筛选得到的ssDNA作为模板进行PCR扩增、纯化.利用生物素-链亲和素磁珠分离法将PCR纯化产物进行分离后获得次级FITC-ssDNA用于下一轮次的筛选,流式细胞仪监测CELL-SELEX筛选进程.选取与膀胱癌细胞系EJ、T24和BIU87结合率最高轮次的ssDNA文库进行PCR扩增、产物纯化、分子克隆和测序;根据测序结果 ,利用Dnaman软件模拟核酸适配体的二级结构.体外合成FITC标记的适配体,流式细胞仪检测适配体与EJ、T24和BIU87的结合率.结果 随着CELL-SELEX流程的推进,FITC-ssDNA与EJ、T24和BIU87细胞的结合率逐渐增加;第15轮FITC-ssDNA与EJ结合率最高,文库中apt1富集度最高;第18轮FITC-ssDNA与T24、BIU87结合率最高,文库中apt2和apt3富集度最高.DNA结构预测分析显示apt1、apt2和apt3的二级结构主要为茎环结构.流式细胞仪检测:FITC-apt1可特异

作者：平秦榕；李翀；梁剑伟；刘杨文易；雷容；王剑松；颜汝平

来源：医学研究生学报 2020 年 33卷 7期