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目的 体外随机合成单链寡核苷酸备选文库,以骨肉瘤U-2 OS完整细胞作为靶点,筛选出与其结合的高特异性、高亲和性单链DNA( ssDNA) .方法 将体外合成随机碱基序列的单链DNA 文库与人骨肉瘤U-2 OS细胞相结合,收获与靶细胞结合的单链DNA,通过优化PCR条件进行大量扩增后,应用生物素-链霉亲和素亲和层析柱分离出正链DNA.结果 以10,14以及18个循环时扩增dsDNA产物最理想;应用生物素-链霉亲和素磁珠分离法制备的正链ssDNA纯度高,可有效保证次级文库的筛选.结论 应用Cell-SELEX技术可成功筛选早期ssDNA文库,为后续获得针对人骨肉瘤U-2 OS细胞的高特异性适配体奠定实验基础.

作者:王华;梁骥;高远;孙娜;马艳;高丽君;夏薇

来源:北华大学学报(自然科学版) 2015 年 16卷 3期

知识库介绍

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作者:
王华;梁骥;高远;孙娜;马艳;高丽君;夏薇
来源:
北华大学学报(自然科学版) 2015 年 16卷 3期
标签:
人骨肉瘤 Cell-SELEX技术 适配体 human osteosarcoma Cell-SELEX aptamer
目的 体外随机合成单链寡核苷酸备选文库,以骨肉瘤U-2 OS完整细胞作为靶点,筛选出与其结合的高特异性、高亲和性单链DNA( ssDNA) .方法 将体外合成随机碱基序列的单链DNA 文库与人骨肉瘤U-2 OS细胞相结合,收获与靶细胞结合的单链DNA,通过优化PCR条件进行大量扩增后,应用生物素-链霉亲和素亲和层析柱分离出正链DNA.结果 以10,14以及18个循环时扩增dsDNA产物最理想;应用生物素-链霉亲和素磁珠分离法制备的正链ssDNA纯度高,可有效保证次级文库的筛选.结论 应用Cell-SELEX技术可成功筛选早期ssDNA文库,为后续获得针对人骨肉瘤U-2 OS细胞的高特异性适配体奠定实验基础.

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