目的:利用pGEM-T Easy vector构建 pET15b-SOD1 重组质粒.方法: 以pBluescript II SK-SOD1质粒为模板, 应用pfu DNA 聚合酶,聚合酶链反应法(PCR) 扩增SOD1 cDNA.将扩增的SOD1 cDNA 与三磷酸脱氧腺苷(dATP) 反应,然后通过Taq DNA聚合酶具有的非模板依赖性末端转移酶活性在SOD1 cDNA的3'末端加"A"并纯化,然后将纯化后的SOD1 cDNA与pGEM-T Easy vector直接连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,蓝白筛选,挑选白色克隆扩增、鉴定,重组的质粒命名为 pGEM-T Easy-SOD1.pGEM-T Easy-SOD1 和 pET15b 分别用Xho Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切, 采用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收所需片断,前者回收470 bp 的SOD1 cDNA片段,后者回收线性化的 pET15b 片段,将两者连接后转化大肠杆菌DH5α,抽提后的重组体质粒命名为pET15b-SOD1,然后对pET15b-SOD1进行酶切和核苷酸序列测序鉴定.结果:重组质粒pET15b-SOD1经测序分析证实:克隆入pET15b-SOD1的人SOD1 cDNA与GeneBank"AB087266"登录的人SOD1 cDNA序列一致,从而成功构建了pET15b-SOD1 重组质粒.结论:pET15b-SOD1重组质粒的构建为细胞穿透肽介导的SOD1转导提供了一对照载体.
作者：丁鹏；王家宁；黄永章；杨波
来源：郧阳医学院学报 2005 年 24卷 2期
