目的 构建刚地弓形虫热休克蛋白70( TgHSP70)真核表达重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70,并在HEK 293T细胞内获得表达,为制备基因疫苗奠定基础.方法 扩增TgHSP70基因,双酶切后与真核表达质粒p3×Flag-CMW-14连接,经酶切、PCR及测序鉴定；脂质体法将重组体转染HEK 293T细胞中,TgHSP70的表达产物通过RT-PCR和western blot在基因和蛋白2个水平鉴定.结果 PCR扩增获得约495 bp的HSP70基因片段,p3×Flag-CMW-14-TgHSP70重组质粒构建成功,经双酶切、PCR及测序鉴定,重组质粒基因序列完全正确；将p3 × Flag-CMW-14-TgHSP70转染到HEK 293T细胞中,经RT-PCR检测获得预期大小目的基因条带,Western-blot 检测表达产物大小约19 kDa.结论 成功构建了真核表达重组质粒p3 × Flag-CMW-14-TgHSP70,并在HEK 293T正确表达.
作者：殷丽天；刘阳；孟晓丽；王海龙；刘红丽；殷国荣
来源：中国公共卫生 2012 年 28卷 9期
