目的 探究CD73/腺苷/腺苷A2A受体(A2AR)通路在细粒棘球蚴抑制巨噬细胞炎症反应中的作用及机制.方法 取健康C57BU6小鼠腹腔注射无菌淀粉肉汤(0.5 ml/只),3d后抽取腹腔液,分离巨噬细胞,以1 × 106/ml接种于6孔板中,待细胞贴壁后,加入细粒棘球蚴囊液(终浓度0.8 mg/ml)培养0、6、12、18和24 h后,qRT-PCR检测CD73、A2AR、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和精氨酸酶1(Arg-1)的相对转录水平,流式细胞术检测CD73的表达量,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测A2AR、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达量.取分离的巨噬细胞接种于6孔板(1 × 106个细胞/孔),囊液组、给药组和对照组(每组3孔)分别加入囊液(终浓度0.8 mg/ml)、囊液(终浓度0.8 mg/ml)和药物(腺苷受体抑制剂SCH58261,终浓度50 μmol/L),以及等量培养基,培养24 h后,采用qRT-PCR检测TNF-α、Arg-1的相对转录水平,Western blotting检测ERK1/2、p-ERK1/2的表达量.取6~8周龄健康C57BU6雌鼠,感染组小鼠于肝被膜下注射5 000个细粒棘球蚴原头节(20 μl/只),健康组小鼠不作处理.1个月后,两组各取6只小鼠,取肝脏,石蜡包埋后制备切片,HE染色观察肝组织病变情况,免疫组织化学染色检测A2AR的表达情况,流式细胞术检测包囊近端和远端肝组织的CD73
作者:逯君霞;许军英;赵彬;王芊文;李文华;耿玉庆;侯隽;吴向未;陈雪玲
来源:中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2023 年 41卷 5期