目的:通过基因沉默RhoC联合雷帕霉素阻断mTOR通路对肝癌细胞侵袭和转移影响的实验研究,证明二者联合能显著抑制肝癌侵袭、迁移,寻找治疗肝癌的新分子靶点.方法:RhoC-siRNA质粒转染BEL7402细胞,荧光显微镜检测转染效率;Western blot方法鉴定RhoC的基因沉默效果.实验分为6组:空白对照BEL7402组、阴性对照Scramble-siRNA组、阴性对照Scramble-siRNA+ Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组、RhoC-siRNA+ Rapa组.采用半定量RT-PCR法检测侵袭相关因子MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、P27RF-Rho以及凋亡相关因子Survivin表达;免疫细胞化学法检测MMP2、MMP9的表达;采用划痕实验,细胞黏附实验,Transwell小室检测细胞的侵袭转移.结果:Scramble-siRNA+Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、p27RF-Rho、Survivin和空白对照BEL7402组、阴性对照Scramble-siRNA组比较表达降低(P＜0.05),RhoC-siRNA联合Rapa组的表达显著降低(P＜0.01);Scramble-siRNA+ Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组抑制肝癌细胞侵袭和迁移(P＜0.05),而RhoC-siRNA联合Rapa组显著抑制肝癌细胞的侵袭迁移(P＜0.01).结论:RhoC-siRNA联合雷帕霉素能显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭,是治疗肝癌的良好分子靶点.

作者：郑鹏远；谢淑丽；张若岩；吕国悦；王广义

来源：中国免疫学杂志 2014 年 30卷 3期