目的 用RNA干扰技术阻断人膀胱癌T24细胞中Yes相关蛋白1(YAP1)基因的表达,观察细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化.方法 检测人膀胱癌T24细胞中YAP1表达水平;采用真核转录质粒pGreenPuro构建针对YAP1基因的重组转染质粒.将4种不同序列的YAP1短发卡RNA(shRNA)质粒以及含与YAP1无关序列的对照质粒(YAP1 shRNA NC)分别转染T24细胞,48 h后行实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其YAP1表达水平,筛选YAP1基因沉默效果最好的shRNA质粒干扰T24细胞;使用噻唑蓝(MTT)检测shRNA质粒对T24细胞增殖能力的影响、划痕实验检测其对迁移能力的影响、Transwell小室体外侵袭实验检测侵袭能力的影响.结果 RT-qPCR检测T24细胞阳性表达YAP1基因,用Lipofectamine 2000成功将不同YAP1 shRNA质粒转染入T24细胞;RT-qPCR检测发现YAP1 shRNA3质粒沉默T24细胞YAP1表达效果最显著(抑制率为75.5％),随后用YAP1 shRNA3质粒干扰T24细胞,MTT检测结果显示转染YAP1 shRNA3质粒组T24细胞增殖能力小于空白对照组(干扰组增殖率为空白对照组的85.9％,P=0.000);转染YAP1 shRNA3的T24细胞迁移能力较空白对照组低[24h平均划痕宽度分别为(218.50±3.50) μm和(86.5±4.50) μm,P=0.003];转染YAP1 shRNA3的T24细胞侵袭能力较空白对照组弱(穿透Transwe

作者：董锐；王行环

来源：中华实验外科杂志 2017 年 34卷 12期