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靶向大肠埃希菌外膜蛋白的18β-甘草次酸的筛选及抗菌活性评价系统构建
编辑人员丨1周前
目的:以大肠埃希菌桶状蛋白组装复合物的核心组分BamA和BamD作为靶点，从甘草提取物中进行抗菌活性成分的筛选，以应对日益严峻的抗生素耐药问题。方法:使用亲和超滤联合高效液相色谱-质谱(high performance liquid chromatography-mass spectrometry，HPLC-MS)技术，从甘草提取物中筛选能够与BamA和BamD相互作用的化合物。用荧光定量PCR检测化合物处理后大肠埃希菌外膜蛋白 bamA和 bamD基因表达量的变化，并且利用离体重组系统检测化合物对于β桶状蛋白组装(β-barrel assembly machinery, BAM)复合物整合外膜蛋白功能的影响，最后利用SDS在细菌细胞内的积累情况检测化合物处理过后细菌细胞膜完整性变化。 结果:生物亲和超滤联合HPLC-MS筛选发现18β-甘草次酸可以与BamD发生相互作用，经18β-甘草次酸处理后，大肠埃希菌 bamA基因表达水平升高1.5倍， bamD基因表达水平升高2倍，但是，离体重组系统检测未观察到18β-甘草次酸对BAM复合物的插膜功能具有抑制效果，细胞膜完整性检测实验也未发现18β-甘草次酸对于大肠埃希菌细胞膜的破坏。 结论:以BamA和BamD蛋白作为靶点，建立了使用亲和超滤联合HPLC-MS进行天然产物筛选的方法。筛选得到18β-甘草次酸能够与BamD相互作用并能够影响大肠埃希菌外膜蛋白的表达，故本研究所建立的筛选和实验流程对于以外膜蛋白为靶点的、其他来源的新型抗菌药物的筛选具有良好的借鉴价值，且本研究也提示在筛选过程中，相关靶点的选择对成功筛选到相应的天然产物至关重要。
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编辑人员丨1周前
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反式自主转运蛋白紧密黏附素Intimin离体重组系统的建立
编辑人员丨1周前
目的:构建反式自主转运蛋白的离体重组系统，以用于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。方法:以大肠埃希菌紧密黏附素Intimin为例，进行离体重组系统的构建。获得Intimin的过表达菌株后，将其制备成原生质球，诱导Intimin表达。纯化重组表达的桶状蛋白组装复合物，将其制备成蛋白脂质体。反应体系中加入蛋白酶K处理后，观察转运是否成功。结果:原生质球诱导表达未折叠的Intimin后，向体系中加入桶状蛋白组装复合物制备的蛋白脂质体，反应结束后加入蛋白酶K处理。与不加蛋白脂质体的对照组相比，能观察到Intimin不被蛋白酶K消化，表明Intimin被成功转运至膜上。结论:反式自主转运蛋白Intimin的跨膜转运需要桶状蛋白组装复合物的参与。本研究成功建立反式自主转运蛋白的离体重组系统，从而有助于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。
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编辑人员丨1周前
