目的:以大肠埃希菌桶状蛋白组装复合物的核心组分BamA和BamD作为靶点，从甘草提取物中进行抗菌活性成分的筛选，以应对日益严峻的抗生素耐药问题。方法:使用亲和超滤联合高效液相色谱-质谱(high performance liquid chromatography-mass spectrometry，HPLC-MS)技术，从甘草提取物中筛选能够与BamA和BamD相互作用的化合物。用荧光定量PCR检测化合物处理后大肠埃希菌外膜蛋白 bamA和 bamD基因表达量的变化，并且利用离体重组系统检测化合物对于β桶状蛋白组装(β-barrel assembly machinery, BAM)复合物整合外膜蛋白功能的影响，最后利用SDS在细菌细胞内的积累情况检测化合物处理过后细菌细胞膜完整性变化。 结果:生物亲和超滤联合HPLC-MS筛选发现18β-甘草次酸可以与BamD发生相互作用，经18β-甘草次酸处理后，大肠埃希菌 bamA基因表达水平升高1.5倍， bamD基因表达水平升高2倍，但是，离体重组系统检测未观察到18β-甘草次酸对BAM复合物的插膜功能具有抑制效果，细胞膜完整性检测实验也未发现18β-甘草次酸对于大肠埃希菌细胞膜的破坏。 结论:以BamA和BamD蛋白作为靶点，建立了使用亲和超滤联合HPLC-MS进行天然产物筛选的方法。筛选得到18β-甘草次酸能够与BamD相互作用并能够影响大肠埃希菌外膜蛋白的表达，故本研究所建立的筛选和实验流程对于以外膜蛋白为靶点的、其他来源的新型抗菌药物的筛选具有良好的借鉴价值，且本研究也提示在筛选过程中，相关靶点的选择对成功筛选到相应的天然产物至关重要。

目的:探究18α甘草次酸(18α-GA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的保护作用，为18α-GA的临床应用提供理论依据和实验基础。方法:将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组：DSS模型组，阳性药对照组，18α-GA高、中、低剂量组，每组8只，5组小鼠均采用3% DSS溶液连续喂养7 d建立急性UC动物模型，同时各组分别每天腹腔注射100 mg/kg生理盐水、100 mg/kg柳氮磺吡啶、40 mg/kg 18α-GA、20 mg/kg 18α-GA、10 mg/kg 18α-GA。每天测量并记录小鼠的体重，评估小鼠疾病活动指数(DAI)。第8天处死小鼠，取小鼠结肠测量其长度；切片观察结肠黏膜并进行病理学评分；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路相关蛋白表达；酶联免疫吸附试验(ELISA)测定结肠组织中IL-1β含量。结果:与DSS模型组比较，18α-GA高、中剂量组第7天时的体重减轻幅度明显更小(均 P<0.05)；结肠长度更长(均 P<0.05)，结肠黏膜病理学评分明显更低(均 P<0.05)；结肠组织中GSDMD、cleaved-caspase1及IL-1β的表达显著更低(均 P<0.05)；18α-GA高剂量组DAI评分更低( P<0.05)；结肠组织中NLRP3表达更低( P<0.05)。 结论:18α-GA可通过抑制NLRP3炎症小体通路的激活，改善DSS诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎。

[目的]探究 18β-甘草次酸(18β-GA)通过调控莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点 1(PIM1)对宫颈癌细胞及裸鼠移植瘤自噬与凋亡的影响.[方法]以浓度梯度(50、100、150 μmol/L)18β-GA作用于宫颈癌Hela细胞,明场与免疫荧光染色观测细胞形态变化,AutoDock Vina软件对 18β-GA与PIM1 进行分子对接.用 100 μmol/L 18β-GA处理敲低及过表达PIM1 的Hela细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测增殖抑制率,蛋白印迹检测蛋白表达变化.以Hela细胞构建裸鼠宫颈癌移植瘤模型,成瘤后随机分为 18β-GA实验组与对照组,每日分别灌胃100 mg/kg 18β-GA与等量生理盐水溶液.14 d后取移植瘤切片,行苏木精-伊红(HE)染色对比两组移植瘤组织形态,免疫荧光染色与蛋白印迹检测对比移植瘤蛋白表达水平.[结果]与对照组相比,随着18β-GA作用浓度的增加,PIM1、B细胞淋巴瘤-2(BCL-2)表达降低,自噬蛋白Beclin-1 表达升高,细胞增殖抑制率增高(P＜0.05).敲低PIM1 与敲低PIM1 后加18β-GA处理组比较细胞增殖抑制率、PIM1、Beclin-1 与BCL-2 表达水平无明显差异(P＞0.05),而过表达PIM1 与过表达PIM1 后加 18β-GA处理组比较上述结果有显著差异(P＜0.05).18β-GA可以与PIM1 稳定结合于PHE-100,结合能为-7.3 kcal/mol.18β-GA可抑制裸鼠移植瘤组织中PIM1与白细胞介素-6(IL-6)表达,降低信号转导和转录激活因子3(STAT3)磷酸化,进而抑制增殖细胞核抗原(PCNA)、抗凋亡蛋白BCL-2 表达,增加Beclin-1 表达(P＜0.05).[结论]18β-GA通过抑制PIM1 进而下调BCL-2 促进Beclin-1 表达,促进宫颈癌细胞自噬与凋亡,减少裸鼠移植瘤STAT3磷酸化,降低PCNA、IL-6 表达,进而发挥对Hela宫颈癌小鼠的抑瘤作用.

目的 研究交趾黄檀Dalbergia cochinchinensis Pierre ex Laness心材的化学成分.方法 交趾黄檀心材 70%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果 从中分离得到 23 个化合物,分别鉴定为 3-O-乙酰基白桦酯醛(1)、2,2'-oxybis(1,4-di-tert-butylbenzene)(2)、对羟基苯甲酸乙酯(3)、1-乙酰基-Β-咔啉(4)、7-羟基二氢黄酮(5)、棕榈酸(6)、hexadeca-4,7-diene(7)、亚油酸(8)、对羟基苯甲酸甲酯(9)、2-(2-羟基-1-甲基-2-苯基)-4,5-二甲氧基苯酚(10)、2-甲氧基-3-羟基口山酮(11)、对苯二甲酸二丁酯(12)、6,4'-二羟基-7-甲氧基黄烷(13)、pteroyanin G(14)、benzoic acid,4-ethoxy-2-methoxy-,methyl ester(15)、甘草素(16)、4,2',5'-三羟基-4'-甲氧基查尔酮(17)、7-羟基-6-甲氧基黄酮(18)、6,4'-二羟基-7-甲氧基二羟黄酮(19)、2'-羟基芒柄花黄素(20)、3'-甲氧基芒柄花黄素(21)、3'-羟基芒柄花黄素(22)、6,7,4'-三羟基二氢黄酮(23).结论 化合物 2、4 为首次从黄檀属植物分离得到.化合物 6～8、19、21 为首次从该植物分离得到.

为研究临床常用中药白芷中的化学成分,本实验利用各种色谱分离技术,结合核磁共振波谱对分离得到的单体化合物进行结构鉴定,结果从白芷乙醇提取物中共鉴定出18个非香豆素类化合物,分别为甘草素(1)、柚皮素(2)、橙皮素(3)、柚皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、橙皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、柚皮苷(6)、新橙皮苷(7)、柚皮芸香苷(8)、3-羟基-5,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮醇3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、开环异落叶松脂醇(10)、松脂素单甲基醚-β-D-葡萄糖苷(11)、连翘苷(12)、牛蒡子苷(13)、(-)-松脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(14)、金钱草碱(15)、1-H-咪唑并[4,5-d]哒嗪-2-胺(16)、咖啡酸乙酯(17)、咖啡酸甲酯(18).除化合物15外,其他17个化合物均为首次从白芷中分离得到,对所有化合物进行抗炎活性筛选,结果表明化合物3和18对zymosan诱导中性粒细胞释放超氧化物具有一定的抑制作用,IC50分别为77.8±2.4 μmol/L和44.7±13.5 μmol/L;化合物1和18对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7的NO产生有一定抑制活性,IC50分别为44.7±4.1 μmol/L和94.5±1.9 μmol/L.

目的 将微波合成技术应用于高附加值中药单体 18α-甘草次酸的制备,以建立更高效、经济的工艺路线.方法 以天然来源丰富且廉价的 18β-甘草次酸为原料,通过微波辐射促进C-18β的构型翻转,实现18α-甘草次酸的制备,利用HRMS、1H-NMR、13C-NMR、HPLC、旋光和熔点进行结构确认及纯度鉴定;首次实现双键移位副产物的分离并通过X-单晶衍射确认结构,辅助推测反应机制使过程更清晰.结果 相比于传统加热,微波辅助技术极大提高了制备效率,以 5.0 g反应原料为例,反应温度120℃,反应时间20 min;简化了后处理操作,重结晶溶剂200 mL,回流时间 30 min.结论 微波辅助合成法是目前18α-甘草次酸高效、经济的制备方法,符合绿色化学的理念;双键移位副产物的首次分离和结构鉴定,弥补了相关研究的空白,为后续质量控制奠定了基础.

目的 建立HPLC梯度洗脱法同时测定天麻首乌片(TSP)中12种活性成分芍药苷、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)、天麻素、阿魏酸、毛蕊花糖苷、甘草苷、丹参酮ⅡA、特女贞苷、欧前胡素、芦丁、蟛蜞菊内酯和大黄素的量.方法 采用HPLC法,Hypersil GOLD C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相,体积流量1.0 mL/min,梯度洗脱;进样量为10μL.结果 12种活性成分芍药苷、二苯乙烯苷、天麻素、阿魏酸、毛蕊花糖苷、甘草苷、丹参酮ⅡA、特女贞苷、欧前胡素、芦丁、蟛蜞菊内酯和大黄素分别在3.12～31.20μg/mL (r=0.999 5)、4.98～49.80 μg/mL (r=0.999 4)、1.05～10.50 μg/mL (r=0.999 5)、0.99～9.90μg/mL (r=0.999 2)、1.11～11.10 μg/mL (r=0.999 2)、3.24～32.40 μg/mL (r=0.999 2)、3.63～36.30 μg/mL (r=0.999 2)、1.13～11.30 μg/mL (r=0.999 3)、1.9～19.0 μg/mL (r=0.999 5)、1.55～15.50μg/mL (r=0.999 5)、1.48～14.80 μg/mL (r=0.999 5)、102.8～1028.0 μg/mL (r=0.999 9)质量浓度与峰面积具有较好的线性关系;精密度、重复性良好,RSD均小于2.0％;平均加样回收率和相应的RSD分别为99.88％、1.55％,101.25％、0.98％,99.67％、1.29％,102.04％、1.17％,101.17％、1.67％,98.27％、1.51％,100.28％、1.20％,99.11％、0.95％,98.49％、1.67％,101.57％、0.94％,102.37％、0.58％,97.89％、0.69％.12批次供试品中12种指标成分质量分数分别为1.241～1.261、2.116～2.133、0.540～0.558、0.077～0.099、0.089～0.110、1.111～1.134、0.158～0.183、1.375～1.399、0.342～0.372、0.542～0.571、0.648～0.672、45.05～45.93 mg/g.结论 建立的HPLC梯度洗脱法可同时测定TSP中12种活性成分,该方法操作简便、快速、准确,可作为TSP全面可靠的质量控制方法.

目的 研究连花清瘟胶囊化学成分.方法 采用硅胶、凝胶柱色谱、液相色谱等多种色谱方法对其进行分离和纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定.结果 从连花清瘟胶囊孔树脂70％乙醇部位分离得到20个化合物,分别鉴定为芦荟大黄素(1)、连翘脂素(2)、cepharanone B(3)、松脂醇(4)、表松脂醇(5)、松脂素单甲醚(6)、胡椒内酰胺A(7)、反式对羟基肉桂酸乙酯(8)、刺芒柄花素(9)、异甘草素(10)、柚皮素(11)、山柰酚(12)、ω-羟基大黄素(13)、大黄酸(14)、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(15)、4,5-dioxodehydroasimilobine(16)、kaempferol-3-O-α-L-ramnopyranosyl-4"-O-E-(4-hydroxy)-cinnamoyl(17)、大黄酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(18)、大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(19)、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(20).结论 化合物2、3、5～17、19、20为首次从该复方中分离得到,为阐明连花清瘟胶囊药效物质奠定了基础.

目的 探讨肝宁片联合异甘草酸镁注射液治疗慢性病毒性肝炎的临床疗效.方法 选取2016年5月—2017年5月在南阳市第二人民医院进行治疗的慢性病毒性肝炎患者88例为研究对象,根据用药的不同将患者分为对照组和治疗组,每组各44例.对照组静脉滴注异甘草酸镁注射液,150 mg加入到5%葡萄糖注射液250 mL中,1次/d.治疗组在对照组基础上口服肝宁片,0.9 g/次,3次/d.两组患者均治疗4周.观察两组的临床疗效,比较两组的肝纤维化指标、肝功能指标和血清学指标.结果 治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为81.82%、95.45%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)水平均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组肝纤维化指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组血清ALT、AST、TBIL水平均明显降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组肝功能指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、白细胞介素-18(IL-18)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组血清学指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 肝宁片联合异甘草酸镁注射液治疗慢性病毒性肝炎具有较好的临床疗效,可改善患者肝功能和肝纤维化指标,调节血清TGF-β1、MIF、IL-18和MMP-13水平,具有一定的临床推广应用价值.

目的 对中药复方四妙勇安汤水煎液中的化学成分进行研究.方法 利用硅胶、ODS、Sephadex LH-20、AB-8大孔吸附树脂柱色谱等分离技术对四妙勇安汤水煎液中化学成分进行分离,结合理化性质及MS、NMR等谱学数据鉴定其结构.结果 从四妙勇安汤水煎液中共分离并鉴定了22个化合物,分别为5(S)-5-carboxystrictosidine (1)、哈巴俄苷(2)、京尼平苷(3)、甘草次酸(4)、甘草酸(5)、金丝桃苷(6)、甘草苷(7)、异甘草苷(8)、甘草素(9)、异甘草素(10)、木犀草素(11)、槲皮素(12)、2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl) ethyl O-α-arabinopyranosyl-(1→6)-O-α-rhamnopyranosyl-(1→3)-O-β-glucopyranoside (13)、安格洛苷C(14)、类叶升麻苷(15)、桂皮酸(16)、阿魏酸(17)、(E)-aldosecologanin (18)、原儿茶酸(19)、豆甾醇(20)、三十一烷醇(21)、胡萝卜苷(22).结论 化合物1～3、5、6、8、11、13～15、18～21为首次从四妙勇安汤中分离得到.