目的 评价抗抑郁新药盐酸羟哌吡酮(代号:YL-0919)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样和焦虑样行为的作用及对LPS诱导的BV2细胞炎症因子转录水平的影响.方法 ①将雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+YL-0919组和模型+YL-0919+BD1047(Sigma-1受体拮抗剂)组,在实验第1天和第6天分别ip给予小鼠LPS 0.5 mg·kg-1,并于第2～6天每天2次ig给予YL-09192.5 mg·kg-1,或同时每天1次伴随ip给予BD10474 mg·kg-1.以开场实验评价小鼠自发活动和焦虑样行为,以强迫游泳实验评价小鼠抑郁样行为.Western印迹法检测各组小鼠前额叶皮质NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白表达水平.②BV2细胞分为细胞对照组、LPS组(LPS 1 mg·L-1 孵育6 h)、LPS+ YL-0919组(YL-09192 μmol·L-1预处理1h后加入LPS 1 mg·L-1孵育6h)和LPS+YL-0919+NE-100组(同时给予YL-09192 μmol·L-1和Sigma-1受体拮抗剂NE-10010 μmol·L-1预处理1h后加入LPS 1 mg·L-1孵育6h),用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BV2细胞内IL-6和IL-1βmRNA表达水平.结果 ①与正常对照组相比,LPS模型组小鼠自发活动无显著变化,但开场实验中央区的停留时间和进入中央区次数显著减少(P<0.05,P<0.01),强迫游泳不动时间显著延长(P<0.01),前额叶皮质IL-1β和NLRP3蛋白表达明显上调(P<0.05);与LPS模型组相比,模型+YL-0919组上述变化显著逆转(P<0.05,P<0.01);而该逆转作用可被BD1047所阻断(P<0.05,P<0.01).②与细胞对照组比较,LPS模型组BV2细胞IL-1β和IL-6 mRNA水平上调(P<0.01);与LPS模型组相比,模型+YL-0919组细胞上述变化显著逆转(P<0.01),该作用可被NE-100所阻断(P<0.05).结论 YL-0919可对抗LPS模型小鼠的焦虑样/抑郁样行为效应,并抑制LPS诱导的BV2细胞炎症因子转录水平的增加,其机制可能由Sigma-1受体介导.

目的 评价抗抑郁新药盐酸羟哌吡酮(YL-0919)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样和焦虑样行为的影响及可能机制.方法 将雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+YL-0919组和模型+YL-0919+BD1047组,在实验第1天和第6天分别给予小鼠腹腔注射LPS(0.5 mg·kg-1)构建动物模型,并于第2天起每天2次ig给与YL-0919(2.5 mg·kg-1)或同时每天1次伴随ip给与Sigma-1受体(Sig-1R)拮抗剂BD1047(4 mg·kg-1),连续给药5d.以开场实验评价小鼠自发活动和焦虑样行为,以强迫游泳实验评价小鼠抑郁样行为.Western印迹法检测各组小鼠前额皮质NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)的表达,用反转录多聚合酶链反应(RT-qPCR)检测YL-0919(2 μmol·L-1)预处理1h对LPS(1 mg·L-1)孵育 6h的BV2 小胶质细胞炎症因子mRNA水平的影响.结果 与正常对照组相比,LPS模型组小鼠自发活动没有变化,但其在开场实验中央区的停留时间和进入中央区次数显著缩短(P＜0.05,P＜0.01),在强迫游泳实验中不动时间显著延长(P＜0.01),表现出抑郁样和焦虑样行为;与LPS模型组相比,YL-0919可逆转上述变化(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01),表现出显著抗抑郁和抗焦虑行为活性;且YL-0919抗抑郁和抗焦虑行为效应可以被BD1047所阻断(P＜0.05).小鼠腹腔注射LPS使前额皮质IL-1β和NLRP3表达明显上调(P＜0.05),YL-0919能够抑制IL-1β和NLRP3 在前额皮质的表达(P＜0.01,P＜0.05),且该效应能够被BD1047所阻断(P＜0.05).YL-0919减少LPS诱导的BV2细胞IL-1β和IL-6 mRNA水平的升高(P＜0.01),该作用同样被Sig-1R拮抗剂NE-100所阻断(P＜0.05).结论 YL-0919在LPS诱导焦虑抑郁样动物模型上表现出显著的抗抑郁和抗焦虑行为效应,其机制可能与其激活Sig-1R抑制小胶质细胞激活和炎症因子表达有关.

[目的]胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)可引发猪的传染性胸膜肺炎,给世界养猪业造成了巨大损失.黏附是APP在致病过程中的第一步,新型黏附分子——三聚体自转运黏附素(Trimeric autotransporter adhesin,TAA)是该菌感染肺组织的重要毒力因子,茎部区2 464-2 574氨基酸(BD3)序列区域在细菌的黏附中发挥重要作用,但其如何结合肺脏组织尚属未知.本文表达TAA的茎部功能区,筛选其在肺组织中的结合蛋白.[方法]原核表达及纯化TAA功能区BD3蛋白,与猪肺组织共孵育,通过免疫共沉淀技术捕获BD3的结合蛋白并质谱鉴定.构建猪cDNA文库获取该蛋白核酸序列,进行生物信息学分析.[结果]经质谱分析获得与BD3结合的猪肺组织蛋白的肽段,数据库搜寻比对发现角蛋白1为TAA BD3区与猪肺组织结合的蛋白;构建cDNA文库筛选并测序后获知其基因序列.生物信息学分析显示该序列与猪源及人源角蛋白核酸序列相似性低,猪源细胞角蛋白1作为一个单独的进化分支,与其他角蛋白差异较大;该蛋白在8-100 aa处有一个跨膜区;主要二级结构元件为α螺旋和β折叠;该蛋白在82-362 aa处存在一个G蛋白α亚单位,在515-552 aa处存在一个TSP1区域(凝血酶敏感蛋白1型重复区域).[结论]与TAA茎部BD3结合的猪肺组织角蛋白1的发现,为TAA黏附肺组织细胞的研究奠定基础,有助于揭示APP专嗜肺组织的致病机制.

在大肠杆菌中优化重组人GST-TCF4 βBD(recombinant human GST-TCF4 β-catenin binding domain,rhGST-TCF4 βBD)的表达条件及其生物学活性初探.化学合成的人TCF4 βBD基因片段与pGEX-6P-1表达载体连接,构建重组质粒,再将其转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态细胞中诱导目的蛋白质表达.通过优化诱导时间、诱导温度和IPTG浓度,确定rhGST-TCF4 βBD可溶表达的最佳条件.以GSTrapTM亲和柱分离纯化rhGST-TCF4 βBD后,再以GST Pull-down实验进行生物学活性鉴定.SDS-PAGE结果表明,在大肠杆菌中成功进行了rhGST-TCF4 βBD的可溶表达,确定诱导温度25℃、诱导时间8h和0.2 mmol/L IPTG作为rhGST-TCF4 βBD可溶表达的最佳表达条件,此时表达量达24％,趋于表达量峰值.GST Pull-down实验结果表明,纯化的rhGST-TCF4 βBD能与重组人β-catenin和细胞内源β-catenin特异性结合,具有良好的生物学活性.本文成功进行了rhGST-TCF4βBD在大肠杆菌中的表达条件优化与活性鉴定,为靶向β-catenin/TCF4相互作用小分子抑制剂筛选模型的建立奠定了实验基础.

大豆皂角苷具有增强人体免疫力、降血脂、养肝、抗癌等功效.在国家自然基金资助下,近年来我们对中国野生大豆皂角苷进行了初步研究,结果如下:(1)在国际上已知的5组类别大豆皂角苷之外,从中国野生大豆中鉴定出第6组,即β组新类别,同时发现4个新皂角苷成分A-αg、K-αg、KA-αg和HAb-αg,其中A-αg化合物被确认是A组、α组和β组皂角苷的总前体;(2)发现了控制C-22碳位阿拉伯糖结合的Sg-7位点;(3)鉴定出若干A0突变体、稀有的AuAe表型和高Bd含量的变异种质,并发现α组皂角苷成分的单独存在个体;(4)皂角苷成分表型及基因可以作为新的化学成分有关的遗传标记,通过此标记分析了中国野生大豆的遗传多样性及地理分化;(5)我国南方区域野生大豆AaBc表型及Sg-4基因具有东亚最高频率,意味着是更具有原始祖本特征的区域群体,东亚野生大豆皆来源于我国华南及南方地区野生大豆扩散.