目的 评价抗抑郁新药盐酸羟哌吡酮(代号:YL-0919)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样和焦虑样行为的作用及对LPS诱导的BV2细胞炎症因子转录水平的影响.方法 ①将雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+YL-0919组和模型+YL-0919+BD1047(Sigma-1受体拮抗剂)组,在实验第1天和第6天分别ip给予小鼠LPS 0.5 mg·kg-1,并于第2～6天每天2次ig给予YL-09192.5 mg·kg-1,或同时每天1次伴随ip给予BD10474 mg·kg-1.以开场实验评价小鼠自发活动和焦虑样行为,以强迫游泳实验评价小鼠抑郁样行为.Western印迹法检测各组小鼠前额叶皮质NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白表达水平.②BV2细胞分为细胞对照组、LPS组(LPS 1 mg·L-1 孵育6 h)、LPS+ YL-0919组(YL-09192 μmol·L-1预处理1h后加入LPS 1 mg·L-1孵育6h)和LPS+YL-0919+NE-100组(同时给予YL-09192 μmol·L-1和Sigma-1受体拮抗剂NE-10010 μmol·L-1预处理1h后加入LPS 1 mg·L-1孵育6h),用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BV2细胞内IL-6和IL-1βmRNA表达水平.结果 ①与正常对照组相比,LPS模型组小鼠自发活动无显著变化,但开场实验中央区的停留时间和进入中央区次数显著减少(P<0.05,P<0.01),强迫游泳不动时间显著延长(P<0.01),前额叶皮质IL-1β和NLRP3蛋白表达明显上调(P<0.05);与LPS模型组相比,模型+YL-0919组上述变化显著逆转(P<0.05,P<0.01);而该逆转作用可被BD1047所阻断(P<0.05,P<0.01).②与细胞对照组比较,LPS模型组BV2细胞IL-1β和IL-6 mRNA水平上调(P<0.01);与LPS模型组相比,模型+YL-0919组细胞上述变化显著逆转(P<0.01),该作用可被NE-100所阻断(P<0.05).结论 YL-0919可对抗LPS模型小鼠的焦虑样/抑郁样行为效应,并抑制LPS诱导的BV2细胞炎症因子转录水平的增加,其机制可能由Sigma-1受体介导.

目的 探究咖啡因(CAF)和盐酸羟哌吡酮(代号:YL-0919)对大鼠注意力、行为控制和反应速度的影响,并比较二者作用特点.方法 通过训练构建五选择连续反应时间任务(5-CSRTT)大鼠模型,并分为模型对照组、CAF(2.5,5.0,10.0和20.0 mg·kg-1)组和YL-0919(2.5和5.0 mg·kg-1)组,分别单次ig给予双蒸水、CAF或YL-0919,以准确率、正确次数、错误次数和遗漏次数评价注意力,以冲动次数和固执次数评价行为控制,以平均正确潜伏期和平均摄食潜伏期评价反应速度.结果 与模型对照组比较,CAF 2.5和5.0 mg·kg-1组大鼠注意力、行为控制能力和反应速度均无明显改变,而10.0和20.0 mg·kg-1组大鼠正确次数显著减少(P<0.01),准确率显著下降(P<0.05);YL-0919 5.0 mg·kg-1组大鼠错误次数显著减少(P<0.05),准确率显著提高(P<0.05),而冲动次数、固执次数、平均正确潜伏期和平均摄食潜伏期无明显变化.结论 YL-0919可显著提高5-CSRTT模型大鼠注意力,且不影响其行为控制和反应速度;而CAF具有减弱注意力和行为控制并增强冲动行为的作用.

目的 盐酸羟哌吡酮(YL-0919)是本实验室研发的具有原创化学结构的1.1类抗抑郁新药,具有快速起效的抗抑郁、抗焦虑和促认知活性.然而已经确认的药理学靶标不能充分解释目前的研究结果.本研究旨在筛选YL-0919可能的药理学靶标并探索其潜在作用机制.方法 ① 基于YL-0919的化学结构,结合STarFish技术以及分子对接技术筛选YL-0919的潜在靶标.② 放射性配体与受体结合实验验证筛选的靶标.③ 构建σ-1受体稳转细胞系,通过Bip分离实验以及活细胞钙成像技术评价YL-0919的药理学特性.④ 行为学(旷场实验,强迫游泳,悬尾实验)评价YL-0919的抗抑郁活性.结果 ① 计算机辅助药物筛选预测σ-1受体可能是YL-0919潜在靶标,分子对接提示YL-0919的最佳构象具有很好的接近σ-1受体结合位点的能力,提示YL-0919能与σ-1受体稳定结合.② 放射性配体与受体结合实验发现YL-0919与σ-1受体具有较高亲和力(纳摩尔水平),且对σ-1受体具有选择性.③ Bip分离实验发现YL-0919激活σ-1受体后与Bip解离.YL-0919能促进胞内钙离子释放,然而YL-0919的这种作用可被σ-1受体拮抗剂BD-1047逆转.④YL-0919(2.5 mg·kg-1)在口服给药3～7 d内可显著发挥抗抑郁效应,而氟西汀则需 3 周,提示YL-0919 具有快速起效的优势,然而YL-0919的快速抗抑郁活性被BD-1047(2和4 mg·kg-1,ip)阻断,提示σ-1受体是YL-0919快速起效抗抑郁的关键药理学靶点.结论 ①YL-0919是一种全新的选择性σ-1受体激动剂.②YL-0919在多种抑郁动物模型上具有快速起效的抗抑郁、抗焦虑作用(7d内),σ-1受体是介导这些作用的关键靶标.③ YL-0919能迅速激活胞内钙离子释放,这可能是其发挥抗抑郁作用的机制之一.本研究为基于σ-1受体的快速起效的抗抑郁新药研发提供了新思路.

目的 评价抗抑郁新药盐酸羟哌吡酮(YL-0919)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样和焦虑样行为的影响及可能机制.方法 将雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+YL-0919组和模型+YL-0919+BD1047组,在实验第1天和第6天分别给予小鼠腹腔注射LPS(0.5 mg·kg-1)构建动物模型,并于第2天起每天2次ig给与YL-0919(2.5 mg·kg-1)或同时每天1次伴随ip给与Sigma-1受体(Sig-1R)拮抗剂BD1047(4 mg·kg-1),连续给药5d.以开场实验评价小鼠自发活动和焦虑样行为,以强迫游泳实验评价小鼠抑郁样行为.Western印迹法检测各组小鼠前额皮质NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)的表达,用反转录多聚合酶链反应(RT-qPCR)检测YL-0919(2 μmol·L-1)预处理1h对LPS(1 mg·L-1)孵育 6h的BV2 小胶质细胞炎症因子mRNA水平的影响.结果 与正常对照组相比,LPS模型组小鼠自发活动没有变化,但其在开场实验中央区的停留时间和进入中央区次数显著缩短(P＜0.05,P＜0.01),在强迫游泳实验中不动时间显著延长(P＜0.01),表现出抑郁样和焦虑样行为;与LPS模型组相比,YL-0919可逆转上述变化(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01),表现出显著抗抑郁和抗焦虑行为活性;且YL-0919抗抑郁和抗焦虑行为效应可以被BD1047所阻断(P＜0.05).小鼠腹腔注射LPS使前额皮质IL-1β和NLRP3表达明显上调(P＜0.05),YL-0919能够抑制IL-1β和NLRP3 在前额皮质的表达(P＜0.01,P＜0.05),且该效应能够被BD1047所阻断(P＜0.05).YL-0919减少LPS诱导的BV2细胞IL-1β和IL-6 mRNA水平的升高(P＜0.01),该作用同样被Sig-1R拮抗剂NE-100所阻断(P＜0.05).结论 YL-0919在LPS诱导焦虑抑郁样动物模型上表现出显著的抗抑郁和抗焦虑行为效应,其机制可能与其激活Sig-1R抑制小胶质细胞激活和炎症因子表达有关.

目的 探索小胶质细胞在抗抑郁新药盐酸羟哌吡酮(YL-0919)和氯胺酮(Ket)快速起效中的作用及其可能机制.方法 以含有小胶质细胞特异性耗竭剂PLX5622饲料喂养小鼠,并采用悬尾、强迫游泳及新奇抑制摄食等行为模型检测耗竭小胶质细胞对YL-0919和Ket快速抗抑郁行为的影响;采用免疫荧光染色检测前额皮层小胶质细胞数量;Western印迹法检测前额皮层突触相关蛋白(synapsin-1,PSD-95及GluA1)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达.结果 YL-0919(2.5 mg·kg-1)连续灌胃给药5d产生快速抗抑郁行为效应,表现为在末次给药24h后缩短强迫小鼠强迫游泳和悬尾的不动时间,缩短新奇抑制摄食中的进食潜伏期,YL-0919的快速抗抑郁作用被连续15d伴随给予的PLX5622所阻断.同样条件下Ket(10 mg·kg-1)单次腹腔注射给药24h后能显著降低小鼠悬尾的不动时间,降低新奇抑制摄食中的进食潜伏期,表现出快速抗抑郁的效应,而该效应同样能被连续16d伴随给予的PLX5622所阻断.PLX5622饲料喂养小鼠耗竭92%前额皮质小胶质细胞,而YL-0919和Ket均对剩余小胶质细胞有促增殖的作用.Western印迹结果提示YL-0919显著增强前额皮质synap-sin-1,PSD-95,GluA1和BDNF蛋白表达水平,以上效应均可被PLX5622所阻断.结论 小胶质细胞在YL-0919和Ket的快速抗抑郁行为中发挥关键作用,小胶质细胞参与YL-0919对前额皮层突触可塑性的快速调节.

目的 制备皮质酮(CORT)替代饮水小鼠抑郁样模型,评价盐酸羟哌吡酮(代号:YL-0919)的抗抑郁效应及可能机制.方法 选用成年雄性C57BL/6小鼠,随机分为正常对照组与CORT替代饮水组,其中正常对照组正常饮水,CORT替代饮水组饮用CORT半琥珀酸酯水溶液(25 mg·L-1).饲养21 d后进行蔗糖偏好实验(SPT),随后将CORT替代饮水组小鼠随机分为模型组、模型+YL-0919(1.25,2.5和5 mg·kg-1)组和模型+氟西汀(Flx,10 mg·kg-1)组,慢性ig给药16 d.先后采用旷场实验(OFT)、强迫游泳实验(FST)、悬尾实验(TST)、新物体识别实验(NORT)、新奇抑制摄食实验(NSFT)和SPT评价YL-0919抗抑郁效应;采用免疫荧光法检测双侧海马齿状回双皮质素(DCX)阳性细胞数;Western印迹法检测双侧海马组织内突触后致密蛋白95(PSD95)表达水平.结果 与正常对照组相比,模型组小鼠在FST和TST中的不动时间显著增加(P<0.01),在SPT中蔗糖偏嗜度显著降低(P<0.01),在NSFT中摄食潜伏期显著增加(P<0.01),在OFT中心区累计停留时间明显缩短(P<0.01),在NORT中小鼠物体识别指数显著下降(P<0.01);免疫荧光和Western印迹法检测结果表明,与正常对照组相比,模型组小鼠海马齿状回DCX阳性细胞数显著减少(P<0.05),PSD95表达水平显著下调(P<0.01).与模型组相比,模型+YL-0919组和模型+Flx组小鼠上述变化均明显逆转(P<0.05).结论 YL-0919慢性给药在CORT替代饮水小鼠抑郁样模型中具有抗抑郁效应,该效应可能与促进海马神经可塑性密切相关.