目的:通过观察辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对糖尿病(DM)大鼠肾组织Twist、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及相关上皮-间充质转化和纤维化指标表达的影响,初步探讨SAHA对糖尿病肾病Twist表达变化的可能干预机制.方法:以链脲佐菌素复制DM大鼠模型,实验分为正常对照(NC)组、DM组和SAHA组,每组12只.造模成功8周后,SAHA组用SAHA(25mg·kg-1·d-1)进行灌胃.治疗8周后处死大鼠,HE和Masson染色观察肾组织形态变化;免疫组织化学染色观察肾组织中Twist的表达变化;Western blot法检测肾组织中Twist、HDAC1、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和IV型胶原(Col-Ⅳ)蛋白的表达;real-time PCR检测肾组织中Twist的mRNA表达.结果:DM组的血糖、24h尿蛋白量和肾脏指数均显著高于NC组;而SAHA组肾脏指数与DM组相比有明显降低(P<0.05),24h尿蛋白量虽有降低,但差异无统计学显著性,而血糖无明显改变.与NC组对比,DM组大鼠肾组织中HDAC1、α-SMA和Col-Ⅳ蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调,Twist的mRNA和蛋白表达上调(P<0.05);SAHA组大鼠肾组织中的Twist、HDAC1、α-SMA和Col-Ⅳ蛋白表达量明显低于DM组(P<0.05),且Twist的mRNA的表达比DM组低,E-cadherin蛋白表达较DM组有所上升(P<0.05).相关性结果显示,在糖尿病大鼠肾组织中,Twist与HDAC1蛋白表达呈正相关(P<0.05).结论:SAHA可下调DM大鼠肾组织中Twist的表达,减轻糖尿病肾病大鼠肾纤维化病变,其机制可能与抑制HDAC1和Twist形成进而促进E-cadherin转录有关.

目的 分析总结携带COL4A3或COL4A4基因突变的Ⅳ型胶原相关性肾病患者的临床表型和基因突变的特点,以提高对该疾病的认识.方法 回顾性分析2013年1月-2017年9月于上海交通大学医学院附属新华医院肾脏科明确诊断携带COL4A3或COL4A4基因突变的6个Ⅳ型胶原相关性肾病家系的临床、病理表型和基因突变.基因检测方法为首先对6个家系的先证者进行全外显子组捕获-二代测序(包括COL4A3、COL4A4、COL4A5基因)并进行生物信息学分析,然后运用Sanger法对候选突变位点进行家系内验证.结果 在6个家系中共发现19例患者携带COL4A3或COL4A4基因杂合突变,其中5例携带COL4A3基因杂合突变,14例携带COL4A4基因杂合突变(有2例同时携带2个COL4A4基因杂合突变).共发现7种COL4A3或COL4A4基因突变且均为错义突变(6种为甘氨酸突变为其他氨基酸),其中6种突变之前未见报道.19例患者中,7例出现肾功能下降,其中4例进展至终末期肾脏病(ESRD)并有1例死亡,发生肾功能下降和ESRD的年龄分别为(42.6±10.3)和(53.0±6.9)岁;18例患者有肾性血尿;13例患者有不同程度蛋白尿(其中4例患者尿蛋白水平＞3.0 g/24 h).无患者合并耳聋和眼部病变.7例患者行肾活组织检查,光学显微镜下5例患者表现为局灶节段性肾小球硬化(FSGS),2例患者表现为系膜增生性改变(其中1例免疫荧光表现为IgA肾病).电子显微镜下发现3例患者局部肾小球基底膜(GBM)变薄,无患者出现GBM致密层撕裂、分层等Alport综合征改变.7例患者α3、α5免疫荧光染色均未见异常.结论 携带COL4A3或COL4A4基因突变的Ⅳ型胶原相关性肾病患者中发生肾功能损害和ESRD的并不少见,光学显微镜下多表现为FSGS,易被误诊为其他肾小球疾病.建议对疑似Ⅳ型胶原相关性肾病的患者进行COL4A3、COL4A4、COL4A5基因检测,进一步确诊,予早期干预治疗.

目的 探究精氨酸双糖苷(AFG)对糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏的保护作用及转化生长因子(TGF)-β1和胶原蛋白Ⅳ基因表达相关性研究.方法 随机选取12只小鼠为空白对照组,其余均用高脂饲料和链脲佐菌素(STZ)诱导DN小鼠模型,分为DN模型组、二甲双胍组、10,20,40 mg·kg-1 AFG组,各组分别干预5周,每周检测小鼠血糖浓度,称量小鼠体重,5周末称量小鼠最后体重,计算肾指数,检测24h尿蛋白总量和血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC);HE染色观察肾脏病理变化情况;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肾脏中TGF-β1、胶原蛋白ⅣmRNA的表达情况.结果 AFG给药组的尿蛋白、TC、TG、HDL-C的含量与模型组相比较有显著的下降趋势;经AFG给药组干预后的SOD、GSH、CAT、T-AOC含量与模型组相比较有明显的上升趋势,病理状况减轻;AFG各剂量组小鼠肾脏中TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ基因表达量与模型组相比均显著降低.结论 AFG能降低小鼠24h尿蛋白总量、减轻肾脏病理损伤、减少肾脏中TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ基因的表达,对糖尿病引起的肾损伤有一定的保护作用.

目的:探讨外周血微小RNA-21(miR-21)表达水平与糖尿病肾病(DN)患者肾间质损伤的关系及意义.方法:选取145例糖尿病及DN患者为病理对象,根据发病程度分为中重度DN 41例,轻度DN 44例,单纯糖尿病60例;另以60例同期入院体检的健康志愿者为对照组;抽取空腹肘静脉血,采用荧光定量PCR实验测定miR-21 mRNA表达水平;采用酶联免疫分析仪测定患者肾功能标志物血肌酐、尿氮素、尿酸及胱抑素水平,采用化学发光分析仪测定纤维化损伤标志物转化生长因子(TGF-β)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)及Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平.结果:轻度DN和中重度DN的miR-21 mRNA表达水平高于对照组和单纯糖尿病,中重度DN组的miR-21 mRNA表达水平高于轻度DN,差异有统计学意义(P<0.05).单纯糖尿病、轻度DN和中重度DN的血肌酐、尿氮素、尿酸、胱抑素、TGF-β、HA、CⅣ及PCⅢ水平高于对照组,轻度DN和中重度DN高于单纯糖尿病,中重度DN高于轻度DN,差异有统计学意义(P<0.05).Pearson检验结果显示,糖尿病肾病患者外周血miR-21 mRNA表达水平与血肌酐、尿氮素、胱抑素、TGF-β、CⅣ、PCⅢ均呈直线正相关性(P<0.05).ROC曲线分析结果显示miR-21 mRNA表达对轻度DN和中重度DN均有预测价值(P<0.05).结论:外周血miR-21表达水平与肾间质损伤程度密切相关,有望成为预测DN的发生与发展的重要参考指标.

目的 探讨尿Ⅳ型胶原(ⅣC)及磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体在膜性肾病(MN)中的临床价值.方法 采用磁微粒化学发光法分别检测73例MN患者(MN组)、42例系膜增殖性肾小球肾炎(MsPGN)患者(MsPGN组)及50名体检健康者(正常对照组)尿ⅣC水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测其中57例MN患者及14例MsPGN患者血清PLA2R抗体水平.采用Spearman相关分析评估血清PLA2R抗体与尿ⅣC、尿微量白蛋白(mAlb)的相关性.结果 MN组和MsPGN组尿ⅣC水平明显高于正常对照组(P<0.01),而MN组与MsPGN组之间差异无统计学意义(P>0.05).57例MN患者中有30例血清PLA2R抗体阳性,阳性率为52.6％;14例MsPGN患者PLA2R抗体均为阴性.在MN患者中,PLA2R抗体阳性者尿ⅣC水平明显高于PLA2R抗体阴性者(P<0.01),尿mAlb水平差异无统计学意义(P>0.05).血清PLA2R抗体水平与尿ⅣC水平呈正相关(r=0.370,P<0.01),与尿mAlb水平无相关性(r=0.027,P>0.05).结论 尿ⅣC及血清PLA2R抗体在MN的诊断中有重要价值,且血清PLA2R抗体可用于特发性MN与继发性MN的鉴别诊断.

我国成人糖尿病患病率已达11.6％,城市患病率高达14.3％[1,2],而近几年我国糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的患病率显著增加,社区2型糖尿病患者DN患病率约30％～50％,1型糖尿病患者DN患病率约为30％[3,4].在慢性肾脏病(chronickidneydisease,CKD)肾活检结果中DN诊断占第二位(20.76％),而我国50岁～ 60岁中老年人群中DN是导致终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)首因[5,6].一些生物标志物如血清脂蛋白、β-跟踪蛋白(βTP)[7]等都有助于临床医生早期评定T2DM肾损害患者发生DN的可能性,但典型的临床症状和肾活检仍是DN的主要诊断依据.在T1DM和T2DM患者中肾小球基底膜(glomerular basement membrane,GBM)增厚、系膜扩张和肾小球硬化是最常见的结构性病变[8,9],但肾脏结构改变的细节和DN的结构-功能关系尚不清楚.GBM在肾小球滤过屏障[10]功能特性中起主要作用,主要由Ⅳ型胶原、层粘连蛋白、巢蛋白和硫酸肝素蛋白聚糖组成,并且与两种细胞类型具有高度复杂的“串扰”:肾小球内皮细胞和足细胞[8],而DN中GBM增厚是细胞外基质积累增加和降解失调的结果,足细胞可能在这个过程中起决定性作用.

目的 研究胰岛素控制糖尿病(DM)大鼠血糖后,DM大鼠肾皮质骨形成蛋白和激活蛋白膜结合抑制物(BAMBI)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、凋亡相关的斑点样蛋白2(ASC-2)、胱天蛋白酶1(caspase-1)及炎性介质和相关纤维化指标的表达情况.方法 SD大鼠随机分为正常对照组、DM组及胰岛素处理组.链脲佐菌素(STZ)复制DM大鼠模型,每组8只,DM成模4周后,胰岛素处理组予以皮下注射胰岛素[8 U/(kg·次)],每天3次,连续注射6周后处死大鼠.免疫组织化学染色检测肾皮质BAMBI、NLRP3、上皮钙黏素(E-cadherin)的表达,Western blot法检测肾皮质BAMBI、NLRP3、ASC-2、caspase-1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(Co14)蛋白的表达,实时定量PCR检测肾皮质中BAMBI、NLRP3的mRNA水平,ELISA检测肾皮质中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18的水平.采用Spearman秩相关检验对BAMBI和NLRP3蛋白表达进行相关性分析.结果 与正常对照组相比,DM组肾皮质NLRP3的mRNA和蛋白水平及ASC-2、caspase-1的蛋白水平升高,α-SMA、FN、Col4蛋白表达也升高,而BAMBI的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白表达降低,胰岛素处理组NLRP3的蛋白和mRNA水平及ASC-2、caspase-1的蛋白水平低于DM组,α-SMA、FN、Col4蛋白表达也低于DM组,而BAMBI的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白表达高于DM组;胰岛素处理组IL-1β、IL-18的水平较DM组降低,相关性分析显示在DM组以及胰岛素处理组中BAMBI和NLRP3的表达呈负相关.结论 胰岛素处理可恢复DM大鼠肾皮质中BAMBI的表达,进而抑制NLRP3炎性体激活,减轻DM大鼠肾脏的炎症反应,阻止或延缓糖尿病肾病的病程进展.

目的 研究成纤维细胞生长因子1(FGF1)通过miR-150对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞凋亡及纤维化因子表达的影响.方法 高糖(25.0 mmol/L葡萄糖)刺激HK-2细胞24 h后,检测细胞活力、凋亡及Ⅰ型胶原蛋白(Col-1)、Ⅳ型胶原蛋白(Col-4)、纤连蛋白(FN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)等纤维化标志蛋白的表达.利用GEO数据库分析FGF1及miR-150在糖尿病肾病(DN)患者肾组织中的表达.qRT-PCR及Western-blot检测高糖刺激后miR-150和FGF1在HK-2细胞中的表达,直线回归分析FGF1与miR-150表达的相关性.在HK-2细胞中过表达FGF1及抑制miR-150的表达,高糖刺激后,检测细胞活力、凋亡及纤维化的变化.结果 高糖刺激后,与正常组比较,HK-2细胞活力降低(P＜0.01),细胞凋亡数增加(P＜0.01),纤维化标志物(Col-1、Col-4、FN和TGF-β1)的表达显著升高(P＜0.01).GEO数据库分析结果显示,在DN的肾组织中,FGF1显著下调,miR-150显著上调.高糖诱导后,抑制FGF1表达(P＜0.01)并促进miR-150表达(P＜0.01),两者表达呈负相关.过表达FGF1显著抑制miR-150表达(P＜0.01),但miR-150表达改变不影响FGF1的表达.与高糖组比较,FGF1过表达能显著促进HK-2细胞活力(P＜0.01),降低细胞凋亡(P＜0.01),抑制纤维化标志物的表达;而抑制miR-150进一步促进HK-2细胞活力(P＜0.01),降低细胞凋亡(P＜0.01)及纤维化标志物的表达.结论 FGF1可通过miR-150参与高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞凋亡及纤维化的调节,miR-150可作为DN的潜在诊断标志物.