目的:观察三重脑震荡模型(multiple cerebral concussion，MCC)大鼠海马神经元铁死亡(ferroptosis)的情况。方法:90只清洁级雄性Wistar大鼠，体质量(250±10)g ，按照随机数字表法分为对照组(12只)和模型组(78只)，模型组采用自由落体法撞击大鼠额颞叶部(每天1次，连续3 d)制备大鼠MCC模型。将造模成功的大鼠随机分为12 h组、24 h组、48 h组、72 h组、7 d组、14 d组，每组12只。采用平衡木实验检测大鼠运动协调功能；ELISA法检测大鼠血清谷胱甘肽(glutathione，GSH)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)及炎性因子白介素-1β(interleukin，IL-1β)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)含量；比色法检测海马组织铁离子含量；RT-PCR法和Western blot法检测海马组织谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4，GPX4)、铁蛋白重链(ferritin heavy，FTH)和铁蛋白轻链(ferritin light，FTL)mRNA水平和蛋白含量；普鲁士蓝染色观察脑组织内铁沉积情况；透射电子显微镜法(transmission electron microscope，TEM)观察海马神经元及线粒体超微结构的变化。采用SPSS 24.0软件统计软件进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验。结果:平衡木实验中各组大鼠平衡木通过时间和运动协调能力评分均差异有统计学意义( F＝30.08，60.34，均 P<0.05)，其中48 h组大鼠[(87.00±4.74)s，(4.75±0.43)分]通过时间和运动协调能力评分明显高于对照组[(35.13±6.99)s，(0.75±0.23)分](均 P<0.05)。各组大鼠铁离子总含量、Fe 2+含量和Fe 3+含量均差异有统计学意义( F＝25.20，94.42，40.25，均 P<0.05)，其中48 h组海马组织Fe 2+含量明显高于对照组[(10.17±0.05)ng/μL，(8.65±0.01)ng/μL]( P<0.05)。在RT-PCR和Western blot结果中，各组海马组织GPX4、FTH、FTL mRNA水平和蛋白水平均差异有统计学意义( F＝37.94，82.09，49.01，71.63，28.94，15.78，均 P<0.05)，其中24 h组GPX4[(1.09±0.01)，(0.23±0.01)]和FTL[(1.60±0.03)，(0.64±0.02)]mRNA表达和蛋白含量明显高于对照组[GPX4：(1.00±0.02)、(0.17±0.01)，FTL：(1.00±0.04)，(0.32±0.01)] (均 P<0.05)，24 h组FTH[(0.24±0.03)，(0.07±0.01)]mRNA表达和蛋白含量明显低于对照组[(1.00±0.01)，(0.67±0.03)] (均 P<0.05)。在透射电子显微镜结果中，MCC后不同时间点大鼠海马神经元细胞缩小，核仁破裂，核膜不同程度皱缩，线粒体肿胀变形且有空泡存在，线粒体内嵴结构减少或消失。 结论:三重脑震荡模型大鼠的炎性反应和氧化应激水平升高，海马神经元出现铁死亡特征，尤其在24 h、48 h时最明显。

目的:观察单纯脑震荡及多重脑震荡对大鼠空间认知行为的远期影响.方法:7周龄SD雄性大鼠180只,体重280±30 g,随机分为实验对照组(C)和脑震荡组,用单摆打击装置复制大鼠脑震荡模型.脑震荡组完成第一次打击后随机分为单纯脑震荡(PCC)组和多重脑震荡(MCC)组,多重损伤组完成第二次打击后再随机分为二重脑震荡组(2MCC)和三重脑震荡组(3MCC),重复脑震荡模型打击间隔时间为24 h,对伤后1月、3月、6月大鼠进行水迷宫实验评估其空间认知功能改变.结果:1.伤后1月:(1)逃避潜伏期:与对照组比较,PCC组无统计学差异,2MCC组于第7天,3MCC组于第6、7天有统计学差异.与PCC组比较,2MCC组于第7天,3MCC组于第6、7天有统计学差异.2MCC组与3MCC组比较于第7天有统计学差异.(2)无平台探测实验:各组间差异无统计学意义.2.伤后3月:(1)逃避潜伏期:与对照组比较,PCC组无统计学差异,2MCC组于第5、6、7天,3MCC组于第4、5、6、7天延迟有统计学意义.与PCC组比较,2MCC组无统计学差异,3MCC组第6、7天有统计学差异.2MCC组与3MCC组比较无统计学差异.(2)无平台探测实验:与对照组比较,PCC无统计学差异,2MCC组和3MCC组停留时间缩短具有统计学意义.与PCC组比较仅3MCC组具有显著统计学意义.2MCC组与3MCC组比较无统计学差异.3.伤后6月:(1)逃避潜伏期:与对照组比较,PCC组于第6、7天有统计学差异,2MCC组于第5、6、7天,3MCC组于第2、3、4、5、6、7天延迟有统计学意义.与PCC组比较,2MCC组于第6、7天,3MCC组于第4、5、6、7天有统计学差异.2MCC组与3MCC组比较于第7天有统计学差异.(2)无平台探测实验:与对照组比较,PCC组、2MCC组和3MCC组在原平台象限停留时间缩短均有统计学差异;与PCC组比较,2MCC组和3MCC组具有显著统计学意义,2MCC组与3MCC组比较无统计学差异.结论:随着脑震荡次数的增加,大鼠出现空间认知行为较早和较严重的损坏,并有明显的损伤累积效应,该模型可用于慢性创伤性脑病病理改变的研究.

目的 观察一重与多重脑震荡(multiple cerebral concussion,MCC)大鼠的焦虑行为变化.方法 成年SD大鼠50只,用单摆闭合性脑损伤打击装置复制大鼠一重脑震荡(pure cerebral concussion,PCC)和多重脑震荡(multiple cerebral concussion,MCC)模型,另设一正常对照组(normal,N)每组12只大鼠.于损伤后第14天进行旷场实验(open field test,OFT)和高架十字迷宫实验(high plus maze,HPM)检测,评估其焦虑行为变化.结果(1)在OFT实验中:①PCC组和3 MCC组在中央区行走格数为[9.500(6.50,16.75)]格、[5.00(3.50,9.00)]格,N组为[10.00(7.00,17.88)]格.损伤组在中央区行走的格数与停留时间均少于对照组,3 MCC组与N组、PCC组比较差异有统计学意义,P<0.05(P=0.024,P=0.033).②PCC组和3 MCC组在周边区行走格数为[54.50(26.88,62.25)]格、[65.00(28.50,81.00)]格,N组为[33.00(1.13,51.50)]格.损伤组在周边区(surround areas,SA)行走格数和时间均高于对照组,3 MCC组与N组比较差异有统计学意义,P<0.05(P=0.015).③PCC组和3 MCC组梳理毛发频次为(4.20±1.03)次、(2.44±0.73)次,N组为(5.20±1.62)次.损伤组梳理毛发次数均少于N组,且3 MCC组较N组与PCC组差异有统计学意义,P<0.05(P=0.013,P=0.019).④各损伤组大鼠在旷场实验中CA区行走格数、行走时间与理毛次数,均随着打击次数的增加呈现下降趋势.此外,随着打击次数的增加,损伤大鼠在SA区行走格数与行走时间则呈上升趋势.(2)在HMP实验中:①PCC组和3 MCC组进入开臂次数为[1.00(0.00,1.00)]次、[0.50(0.00,1.00)]次,N组为[1.00(0.00,2.00)]次.各损伤组进入开臂(open arms,OA)次数和时间均少于正常组,但各组间差异无统计学意义,P>0.05.②损伤组在OA中向台下探索次数均少于N组,其中3 MCC组差异有统计学意义,P<0.05(P=0.032).③PCC组和3 MCC组进入闭臂次数为[1.00(1.00,1.00)]次、[0.00(0.00,1.00)]次,N组为[0.00(0.00,1.00)]次.损伤组进入闭臂(enclosed arms,EA)次数与时间均高于N组,进入EA次数,3 MCC组与PCC组比较,差异具有统计学意义,P<0.05(P=0.015);进入EA时间,3 MCC组与N组、PCC组比较差异有统计学意义,P<0.05(P=0.042,P=0.027).④各损伤组大鼠在高架十字迷宫实验中,进入OA臂的次数、时间与向台下探望次数,均随着打击次数的增加呈现下降趋势.此外,随着打击次数的增加,损伤大鼠在EA臂中的停留时间则呈上升趋势.结论 一重和三重脑震荡大鼠损伤后14 d焦虑行为开始明显增加,且大鼠经历三次脑震荡后的焦虑行为重于一次性脑震荡.

目的 研究脑震宁对三重脑震荡模型(multiple cerebral concussion,MCC)大鼠海马神经元损伤的影响及其机制.方法 采用自由落体法制备MCC大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为吡拉西坦(0.16 g/kg)组和脑震宁低、中、高剂量(6.68、13.36、26.73 g/kg)组,各给药组ig相应药物,2次/d,连续给药14d.造模前后进行水迷宫平台实验,观察大鼠学习记忆能力变化;采用ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6水平,WST-1法检测血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;qRT-PCR法检测大鼠海马组织p38、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase,JNK)mRNA 表达;Western blotting 法检测大鼠海马组织 p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK 和 p-JNK蛋白表达;采用苏木素-伊红(HE)、尼氏体染色以及透射电镜(TEM)法分别观察大鼠海马神经元病理、尼氏体及超微结构的变化.结果 与对照组相比,模型组大鼠逃避潜伏时间增加(P＜0.01),固定象限停留时间百分比减少(P＜0.01);血清中IL-1β、IL-6和MDA水平升高(P＜0.05、0.01),SOD活性下降(P＜0.01);海马组织p38、JNK和ERK mRNA表达水平均升高(P＜0.01);海马组织p38、p-p38、JNK、p-JNK、ERK和p-ERK蛋白表达水平均升高(P＜0.05、0.01).与模型组相比,脑震宁组大鼠逃避潜伏时间减少(P＜0.05、0.01),固定象限停留时间百分比增加(P＜0.05、0.01);血清中IL-1β、IL-6、MDA水平降低(P＜0.05、0.01),SOD活性升高(P＜0.01、0.001);海马组织p38、JNK和ERK mRNA表达水平降低(P＜0.05、0.01);脑震宁各剂量组海马组织p38、p-p38和p-ERK蛋白表达水平降低(P＜0.01),脑震宁低、中剂量组JNK和ERK蛋白表达水平降低(P＜0.05),脑震宁中、高剂量组p-JNK蛋白表达水平升高(P＜0.01).HE、尼氏染色结果显示,模型组神经元排列稀疏,数量减少,部分细胞核消失或核仁破裂,胞质内混浊,尼氏体颜色变浅;脑震宁组大部分神经元细胞形态较完整,核大而圆,着色浅,部分细胞出现核仁消失,尼氏体颜色增加.TEM结果显示,模型组神经元细胞体积缩小,核仁破裂分散,微丝排列紊乱,板层崩解、断裂甚至消失;脑震宁组神经元细胞核大,核膜完整,核仁偏移,线粒体内嵴结构清晰,微丝排列较模型组整齐,部分崩解.结论 脑震宁可能通过影响丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的激活改善MCC模型大鼠海马神经元损伤.