脑震宁颗粒是由11味中药组成的复方制剂,临床主要用于治疗脑震荡、脑外伤综合征等.针对其复杂的物质组成,本研究采用UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱建立了脑震宁颗粒化学成分的快速识别方法,通过分析色谱保留行为、精确分子质量、裂解碎片信息,结合文献及对照品数据对照,并借助Compound Discover 2.0自动指认,共鉴定出脑震宁颗粒中161个化合物,并对这些成分的来源进行了归属.所鉴定的成分包括环烯醚萜苷类9个、丁基苯酞类8个、黄酮及黄酮苷类26个、酚酸类8个、单萜苷类8个、生物碱类9个,以及有机酸、氨基酸、糖类等中药材共性成分.本研究首次对脑震宁颗粒的化学组成进行了全面表征,所构建的脑震宁化学成分物质组为其进一步的质量控制和药效物质基础研究奠定了基础.

目的 借助网络药理学技术预测脑震宁颗粒主要成分的潜在作用靶点,探讨其治疗脑外伤多成分-多靶点-多通路的作用机制.方法 依据反向分子对接服务器(DRAR-CPI)和CooLGeN数据库预测和筛选脑震宁颗粒主要成分的作用靶点;采用Cytoscape软件ClueGO插件对靶点进行GO富集分析,借助生物信息学注释数据库(DAVID)对获取的靶点信息进行KEGG通路注释分析;采用Cytoscape软件构建药材-成分-靶点-通路-疾病网络.结果 脑震宁颗粒的33个主要成分涉及丝裂原活化蛋白激酶-1 (MAPK1)、胱天蛋白酶-3(CASP3)、糖原合成酶激酶-3β (GSK3B)等34个靶点,GO富集分析和KEGG通路注释分析提示脑震宁颗粒可作用于活性氧的生物合成、平滑肌细胞增殖等生物过程,以及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、MAPK通路、JAK/STAT、mTOR等信号转导通路;网络分析显示脑震宁颗粒的作用机制可能与调控氧化应激、抑制炎症反应和神经细胞凋亡、调节脑内硫化氢生成和纤溶酶原(PLG)活性、改善认知功能及脑外伤后抑郁等相关.结论 揭示了脑震宁颗粒多成分、多靶点、多通路的作用机制,为进一步深入研究脑震宁颗粒药效物质基础及作用机制奠定了基础.

目的 采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法对脑震宁颗粒无机元素组成进行分析,为其产品质量均一性和安全性评价奠定基础.方法 脑震宁颗粒样品进行微波消解处理,采用ICP-MS法定量测定10批样本中18种无机元素的含量,通过Heatmaps图谱、Pearson相关系数图对结果进行分析;通过无机元素指纹图谱、主成分分析(PCA)结合聚类分析对质量均一性进行评价.结果 脑震宁颗粒中无机元素以K、Ca、P、Na、Mg、Fe为主,且不同元素含量之间存在着一定正相关性.As、Hg、Cd、Pb、Cu这5种重金属元素的限量符合《中国药典》2015年版限度规定.采用平均数和中位数法分别建立无机元素对照指纹图谱,从指纹图谱相似度、聚类分析、PCA结果来看,脑震宁颗粒无机元素的质量均一性较好.PCA结果显示,K、Mg、Sr、Mn、P、Pb等元素可能是影响脑震宁颗粒无机元素质量波动的特征元素.结论 本研究初步明确了脑震宁颗粒的无机元素组成,为其质量均一性和安全性评价奠定了基础.

脑震宁颗粒为经典的中药复方制剂,具有凉血活血、化瘀通络、益血安神、宁心定智、除烦止呕等功效,现代临床常用于治疗脑外伤引起的头痛、头晕、烦躁失眠、健忘、恶心呕吐等.通过梳理现代研究文献,基于中药质量标志物(Q-marker)“五原则”对脑震宁颗粒的Q-marker进行预测分析,进一步对已选定的Q-marker进行现代药理文献综述,构建“Q-marker-靶点-通路-疾病”的网络关联图,以期为脑震宁颗粒的质量控制研究提供参考.

目的 探讨脑震宁方对模型大鼠脑组织神经元的保护作用.方法 通过金属单摆闭合性击打方式,建立脑震荡模型,造模成功的大鼠随机分为模型对照组(给予等体积纯化水)、吡拉西坦组(0.324 g·kg-1)和脑震宁小、中、大剂量组(2.5,5.0,10.0 g·kg-1),每组10只,并设10只正常大鼠作为正常对照组(给予等体积纯化水).各组大鼠分别按10 mL·kg-1灌胃给药,每天1次,连续21 d.采用Weil氏染色和甲苯胺蓝染色检测大脑神经髓鞘和尼氏体结构改变,免疫组化法检测大脑诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、白细胞介素6(IL-6)阳性表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脑组织细胞外信号调节激酶(ERK)、IL-6和MMP-9 mRNA表达.结果 脑震宁方可减轻模型大鼠精神狂躁及脑组织神经髓鞘断裂、弯曲肿胀,促进神经元尼氏体恢复,提高GFAP和MMP-9表达,同时抑制脑组织ERK、IL-6和iNOS表达.结论 脑震宁方可能通过抑制脑震荡后ERK信号通路激活,减轻炎症反应对以神经细胞髓鞘和尼氏体为主要病理改变的神经损伤,从而改善脑震荡产生的精神症状.

目的 研究脑震宁对三重脑震荡模型(multiple cerebral concussion,MCC)大鼠海马神经元损伤的影响及其机制.方法 采用自由落体法制备MCC大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为吡拉西坦(0.16 g/kg)组和脑震宁低、中、高剂量(6.68、13.36、26.73 g/kg)组,各给药组ig相应药物,2次/d,连续给药14d.造模前后进行水迷宫平台实验,观察大鼠学习记忆能力变化;采用ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6水平,WST-1法检测血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;qRT-PCR法检测大鼠海马组织p38、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase,JNK)mRNA 表达;Western blotting 法检测大鼠海马组织 p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK 和 p-JNK蛋白表达;采用苏木素-伊红(HE)、尼氏体染色以及透射电镜(TEM)法分别观察大鼠海马神经元病理、尼氏体及超微结构的变化.结果 与对照组相比,模型组大鼠逃避潜伏时间增加(P＜0.01),固定象限停留时间百分比减少(P＜0.01);血清中IL-1β、IL-6和MDA水平升高(P＜0.05、0.01),SOD活性下降(P＜0.01);海马组织p38、JNK和ERK mRNA表达水平均升高(P＜0.01);海马组织p38、p-p38、JNK、p-JNK、ERK和p-ERK蛋白表达水平均升高(P＜0.05、0.01).与模型组相比,脑震宁组大鼠逃避潜伏时间减少(P＜0.05、0.01),固定象限停留时间百分比增加(P＜0.05、0.01);血清中IL-1β、IL-6、MDA水平降低(P＜0.05、0.01),SOD活性升高(P＜0.01、0.001);海马组织p38、JNK和ERK mRNA表达水平降低(P＜0.05、0.01);脑震宁各剂量组海马组织p38、p-p38和p-ERK蛋白表达水平降低(P＜0.01),脑震宁低、中剂量组JNK和ERK蛋白表达水平降低(P＜0.05),脑震宁中、高剂量组p-JNK蛋白表达水平升高(P＜0.01).HE、尼氏染色结果显示,模型组神经元排列稀疏,数量减少,部分细胞核消失或核仁破裂,胞质内混浊,尼氏体颜色变浅;脑震宁组大部分神经元细胞形态较完整,核大而圆,着色浅,部分细胞出现核仁消失,尼氏体颜色增加.TEM结果显示,模型组神经元细胞体积缩小,核仁破裂分散,微丝排列紊乱,板层崩解、断裂甚至消失;脑震宁组神经元细胞核大,核膜完整,核仁偏移,线粒体内嵴结构清晰,微丝排列较模型组整齐,部分崩解.结论 脑震宁可能通过影响丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的激活改善MCC模型大鼠海马神经元损伤.

目的 观察脑震宁含药血清对Erastin诱导的小鼠海马神经元细胞HT22铁死亡的影响,基于JNK信号通路探讨其作用机制.方法 采用Erastin诱导HT22细胞铁死亡模型,将细胞分为空白组、模型组、Fer-1组、1％脑震宁含药血清组、5％脑震宁含药血清组、10％脑震宁含药血清组、抑制剂+1％脑震宁含药血清组、抑制剂+5％脑震宁含药血清组、抑制剂+10％脑震宁含药血清组,分别加入相应药物培养.TBA法检测细胞丙二醛(MDA)含量,WST-1法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(ROS)含量,比色法检测细胞内铁离子含量,RT-PCR检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链(FTH)、铁蛋白轻链(FTL)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)mRNA表达,Western blot检测细胞GPX4、FTH、FTL、p-JNK、JNK蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组细胞MDA、ROS含量显著增加,SOD活性显著降低,Fe2+含量显著增加,GPX4、FTH、FTL、JNK mRNA和蛋白表达显著升高,p-JNK蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,Fer-1组、抑制剂+5％脑震宁含药血清组、抑制剂+10％脑震宁含药血清组细胞MDA、ROS含量显著减少,SOD活性显著升高,Fe2+含量显著减少(P<0.01),GPX4、FTH、FTL、JNK mRNA和蛋白表达显著降低,p-JNK蛋白表达显著降低(P<0.05).结论 脑震宁含药血清可能通过抑制JNK信号通路激活,降低HT22细胞氧化应激水平,减少细胞内Fe2+含量,改善Erastin诱导的细胞铁死亡.