为评价LTB(大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位)抗原表位PT8A与人轮状病毒(rotavirus,RV) VP8*基因融合后对VP8*亚单位疫苗(VP8)免疫效果的影响,将PT8A分别融合到VP8*基因的C-端和N-端,然后构建重组表达质粒pET32a-PT8A-VP8和pET32a-VP8-PT8A.表达的重组蛋白PT8A-VP8和VP8-T8A纯化后分别经鼻腔免疫BALB/c免疫小鼠,收集血清,间接ELISA法检测血清抗体水平.经测序鉴定,重组质粒pET32a-PT8A-VP8和pET32a-VP8-PT8A构建成功.6×His-VP8-PT8A、6×His-PT8A-VP8融合蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为34 kD.重组VP8-PT8A和PT8A-VP8表达成功,融合蛋白主要以包涵体形式表达.间接ELISA测量血清IgG和肺sIgA的滴度,与VP8组相比较,VP8 +LTB组和VP8-PT8A组OD值有显著性差异(p＜0.05),PT8A-VP8组OD值没有显著性差异(p＞0.05).即PT8A融合在VP8基因的C端后对重组轮状病毒VP8*亚单位疫苗有显著性免疫佐剂活性.

目的 海洋细菌毒素抗肿瘤是近年来兴起的用于癌症治疗的新思路.本文旨在研究耐热直接溶血毒素(TDH)对人肺腺癌细胞SPC-A-1细胞的抑制作用.方法 利用DEAE-纤维素、DEAE-Sephadex A-50、葡聚糖G-75层析的方法,从海洋细菌-副溶血弧菌ATCC33846的代谢物中分离纯化得到纯度较高的耐热直接溶血毒素(TDH).通过MTT法、细胞划痕试验、凋亡试验、caspase-3活性试验比较TDH作用于不同细胞的半抑制剂浓度IC50,研究了TDH对人肺腺癌细胞SPC-A-1细胞的作用.结果 人结肠上皮细胞NCM460、人肝成纤维细胞LO2、人肺腺癌细胞SPC A-1在TDH处理24 h之后,细胞的半抑制剂浓度IC50分别为151 μg/mL、118 μg/mL和6.7 μg/mL,正常细胞的IC50高出肺腺癌细胞近20倍.在低于5μg/mL浓度下,TDH能剂量依赖性抑制SPC-A-1细胞的生长、增殖和迁移能力.流式细胞法和荧光试剂检测表明:5μg/mL的TDH能诱导33％的SPC-A-1细胞发生早期凋亡,并激活caspase-3.结论 TDH可能通过激活caspase-3途径诱导细胞凋亡,从而抑制SPC-A-1细胞的生长和增殖.

柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A 16,CVA16)属于小RNA病毒科肠道病毒属,是手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)的主要病原体之一.近年来发现,CVA16感染的病患可引起脑部、肺部和心脏等的继发感染,甚至还可能引发肺炎、心肌炎和难治性休克等致死性并发症.大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(Escherichia coli heat-labile enterotoxin B subunit,LTB),可作为特异性抗原的黏膜佐剂,用以增强特异性抗原的血清IgG抗体应答.大肠杆菌Ⅱ型不耐热肠毒素B亚单位(Escherichia coli type-Ⅱheat-labile enterotoxin B subunit,LT2B)具有比LTB更强的佐剂活性.本实验对CVA16VP1与LT2B融合蛋白作为抗原的免疫原性的研究,将初步评价产生的抗体的抗体效价,为进一步研究柯萨奇病毒的新型疫苗奠定基础.本研究构建pET32-CVA16VPl-LT2B融合表达载体,诱导表达CVA16VP 1-LT2B蛋白,用于免疫小鼠,采取血清,检测特异性抗体效价.结果 表明,本研究成功构建了pET32-CVA16VP1-LT2B融合表达载体,并成功提取到纯化的CVA 16VP1-LT2B蛋白,间接ELISA检测出抗体效价为1∶800.