目的:观察丹紫康膝冲剂联合温针灸治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎的临床疗效.方法:将 120 例肝肾亏虚型膝骨关节炎患者按随机数字表法分为 4 组(A、B、C、D),每组 30 例.所有患者均予常规股四头肌功能锻炼和健康宣教,在此基础上,A组口服塞来昔布胶囊治疗,B组采用温针灸治疗,C组口服丹紫康膝冲剂治疗,D组采用丹紫康膝冲剂联合温针灸治疗,治疗 4 周.评价 4 组临床疗效,检测 4 组治疗前后白细胞介素-8(IL-8)、血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF-2)水平,比较 4 组治疗前后西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数评分(WOMAC)、视觉模拟评分法(VAS)评分、生活质量评分及中医证候积分,统计 4 组不良反应发生率.结果:D组总有效率为 93.33%,高于其它 3 组(P＜0.05).治疗后,4 组VAS评分、WOMAC评分、中医证候积分、血清IL-8、VEGF水平较治疗前降低(P＜0.05);且D组VAS评分、WOMAC评分、中医证候积分、血清IL-8、VEGF水平低于其他 3 组(P＜0.05).治疗后,4 组FGF-2 水平、生活质量评分较治疗前升高(P＜0.05);且D组FGF-2 水平、生活质量评分高于其他 3 组(P＜0.05).结论:丹紫康膝冲剂联合温针灸治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎可明显缓解膝关节肿痛,减轻炎症反应,改善膝关节功能,其机制可能是通过降低血清IL-8、VGEF水平,促进FGF-2生成以消炎镇痛、保护关节软骨.

目的:探究丹紫康膝冲剂通过抑制IKK/IκB/NF-κB信号通路对膝骨关节炎大鼠关节软骨及血瘀状态的改善作用.方法:将70只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、双氯芬酸钠组、丹紫康膝冲剂低剂量组、丹紫康膝冲剂中剂量组、丹紫康膝冲剂高剂量组和PDTC组,每组10只.采用Hulth法建立KOA模型,假手术组不切断膝前交叉韧带.各药物组大鼠灌胃给予相应药物,假手术组和模型组大鼠均灌胃给予等体积生理盐水,1次/d,连续28 d.HE染色和番红-O-固定绿染色观察软骨病理损伤情况,免疫组织化学法检测软骨组织NF-κB蛋白表达情况;蛋白免疫印记法检测NF-κB p65、p-IκBα、IκBα、p-IKKα、IKKα、p-IKKβ、IKKβ、NLRP3蛋白表达;酶联免疫吸附实验检测外周血IL-1β、IL-18、TNF-α、一氧化氮(NO)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、前列腺素E2(PGE2)、抗II 型胶原抗体亚型(anti-Col Ⅱ-IgG、anti-COL Ⅱ-IG1、anti-Col Ⅱ-IgG2a)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平.结果:与模型组比较,双氯芬酸钠组,PDTC组和丹紫康膝冲剂低、中、高剂量组大鼠软骨损伤和纤维增生减轻;胞核和胞浆NF-κB蛋白发生核转移的数量减少,p-IκBα、p-IKKα、p-IKKβ、NLRP3蛋白表达降低;外周血浆中 IL-1β、IL-18、TNF-α、anti-Col Ⅱ-IgG、anti-Col Ⅱ-IgG2a、NO、PGE2、HIF-1α水平 降低;血浆中 TXB2水平、TXB2/6-keto-PGF1α比值降低,6-keto-PGF1α升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);丹紫康膝冲剂高剂量组大鼠软骨组织p-IKKβ、NLRP3蛋白表达及外周血清中TXB2水平、6-keto-PGF1α水平、TXB2/6-keto-PGF1α比值与双氯芬酸钠组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),而p-IκBα、p-IKKα蛋白表达均低于双氯芬酸钠组(P＜0.05).结论:丹紫康膝冲剂能通过抑制IKK/IκB/NF-κB信号通路的活化,进而降低大鼠关节软骨炎症因子的表达,有效改善大鼠的血瘀状态,以减轻软骨组织病理性损伤,而且随着丹紫康膝冲剂剂量的增加,其作用越强.

目的 探究丹紫康膝冲剂延缓膝骨关节炎(KOA)模型大鼠软骨退变及软骨下骨异常骨重建的可能作用机制.方法 将40只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、双氯芬酸钠组、丹紫康膝冲剂组,每组10只.空白组不做任何处理,其余3组采用Hulth法建立KOA模型.建模成功后,双氯芬酸钠组予5 mg/kg双氯芬酸钠灌胃,丹紫康膝冲剂组予1.67 g/kg丹紫康膝冲剂灌胃,空白组、模型组均予等容积0.9％氯化钠注射液灌胃,每日灌胃1次,连续28 d.采用苏木精-伊红(HE)染色和番红-O-固绿组织染色制作病理切片观察软骨病理损伤情况,并记录病理学退变指标;末端转移酶介导的DIG-dUPT切口末端标记法(TUNEL)观察软骨细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法检测外周血白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Ⅱ型胶原C端肽(CTXⅡ)、Ⅱ型胶原C前肽(CPⅡ)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、MMP-13、骨形态发生蛋白7(BMP-7)蛋白表达;取大鼠右侧胫骨近端关节离体标本进行Micro-CT扫描,测量软骨下骨微结构参数骨体积(BV);骨体积分数:骨体积/总体积(BV/TV)、骨小梁平均厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、体积骨密度(vBMD).结果 经HE染色,空白组大鼠软骨滑膜组织完整,细胞排列整齐,无炎症细胞浸润和基质损伤或蜕变.模型组大鼠软骨组织表面凸凹不平,软骨表层变薄,细胞排列不规则,此外可见大量炎症细胞、中性粒细胞、淋巴细胞浸润,而且深部软骨细胞可见明显细胞核压缩,膝关节宽度和关节退变深度显著增加.与模型组比较,丹紫康膝冲剂组大鼠软骨细胞排列均匀,胞核和胞质逐渐恢复正常.经番红-O-固绿染色,空白组大鼠软骨组织染色均匀,结构清晰.模型组大鼠骨关节面不平,软骨钙化,胶原纤维增生,软骨细胞外基质经番红O染色变浅,染色不均一,而且软骨陷窝结构扩张.与模型组比较,丹紫康膝冲剂组大鼠软骨组织番红O稍淡染,潮线逐渐清晰,细胞排列逐渐均匀.与空白组比较,模型组大鼠关节软骨基质丢失宽度、改良的国际骨关节炎研究会(OARSI)评分、软骨退变总宽度、软骨退变最显著处的宽度均增加(P<0.05);与模型组比较,双氯芬酸钠组、丹紫康膝冲剂组大鼠上述指标则减少(P<0.05);双氯芬酸钠组与丹紫康膝冲剂组大鼠上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).与空白组比较,模型组大鼠软骨细胞凋亡指数升高(P<0.05);与模型组比较,双氯芬酸钠组、丹紫康膝冲剂组大鼠软骨细胞凋亡指数降低(P<0.05);与双氯芬酸钠组比较,丹紫康膝冲剂组软骨细胞凋亡指数降低(P<0.05).与空白组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-18、TNF-α、CTXⅡ水平均升高,CPⅡ水平降低(P<0.05);与模型组比较,双氯芬酸钠组、丹紫康膝冲剂组大鼠血清IL-1β、IL-18、TNF-α、CTXⅡ水平均降低(P<0.05),CPⅡ水平升高(P<0.05);与双氯芬酸钠组比较,丹紫康膝冲剂组大鼠血清IL-1β、IL-18、TNF-α、CPⅡ水平均升高(P<0.05),CTXⅡ水平降低(P<0.05).经Western blot检测,与空白组比较,模型组大鼠软骨组织Bax、MMP-3、MMP-13蛋白表达量升高(P<0.05),Bcl-2、BMP-7蛋白表达量降低(P<0.05);与模型组比较,双氯芬酸钠组、丹紫康膝冲剂组大鼠软骨组织Bax、MMP-3、MMP-13蛋白表达量均降低(P<0.05),Bcl-2、BMP-7蛋白表达量均升高(P<0.05);与双氯芬酸钠组比较,丹紫康膝冲剂组大鼠软骨组织Bcl-2、Bax、MMP-3蛋白表达量降低(P<0.05),BMP-7蛋白表达量升高(P<0.05).经Micro-CT扫描,与空白组比较,模型组大鼠胫骨BV/TV、Tb.Th、Tb.N、vBMD均降低(P<0.05);与模型组比较,双氯芬酸钠组、丹紫康膝冲剂组大鼠胫骨BV/TV、Tb.Th、Tb.N、vBMD均升高(P<0.05);与双氯芬酸钠组比较,丹紫康膝冲剂组大鼠胫骨BV/TV、Tb.Th、Tb.N、vBMD均升高(P<0.05).模型组大鼠胫骨近端软骨表层可见大量基质迫损或丢失,软骨下骨骨小梁数量减少、排列紊乱并出现断裂现象.与模型组比较,丹紫康膝冲剂组大鼠软骨表层基质虽然也存在破损,但是最深至浅层或中层,尚未累及软骨下骨;软骨下骨骨小梁排列整齐,关节边缘未见骨赘形成.结论 丹紫康膝冲剂可有效降低KOA模型大鼠炎症细胞因子分泌和MMPs表达,减轻软骨组织病理性损伤,改善KOA早期软骨下骨生物力学性能和微结构改变,从而延缓KOA大鼠模型软骨组织进行性退变和软骨下骨异常骨重塑的发生.