目的:评价二乙基二硫代氨基甲酸钠(sodium diethyldithiocarbamate, DTC)、左旋咪唑(levamisole, LMS)、咪喹莫特(imiquimod, Imi)3个小分子化合物对铜绿假单胞菌疫苗候选抗原PA0833免疫原性和保护效果的影响，并进一步对其机制进行初步研究。方法:抗原PA0833分别与上述3种小分子以及铝佐剂配伍制备疫苗，通过肌肉注射的方式于0、14、21 d分别免疫BALB/c小鼠。收集3次免疫后血清，ELISA测定PA0833特异性IgG抗体水平。采用铜绿假单胞菌PAO1感染免疫后的小鼠，通过生存率、体重变化、临床评分、炎症因子检测和肺组织病理学改变等评价疫苗的保护效果。在此基础上，对小鼠连续7 d肌肉注射DTC，取肺脏组织进行转录组测序分析，并通过流式细胞术检测其对抗原提呈细胞活化的影响。结果:联用小分子免疫组能够有效提高PA0833特异性IgG抗体效价，降低细菌感染后肺组织中细菌负荷和TNF-α、IL-6、IL-1β炎症因子水平，显著提高细菌感染后的生存率，其中DTC效果最好。转录组测序结果表明，相比于PBS对照组，DTC处理组样本有121个基因表达上调、18个基因下调；差异表达基因主要富集在免疫信号通路，IL-17信号通路活化明显。流式细胞术结果表明DTC能促进脾细胞中Th17细胞分化，且能促进抗原提呈细胞活化。结论:本研究中的3种小分子都能够有效地增强抗原的免疫原性，其中DTC效果最优，可用于新型疫苗佐剂的研发。

目前肿瘤耐药性不断发展成为癌症治疗面临的主要问题.金属元素的应用越来越广泛,尤其是近年来铜死亡的发现,让我们重新聚焦铜在肿瘤治疗上的应用.而铜离子载体与铜联合使用可以提高细胞内Cu水平并发挥抗癌活性.其中双硫仑(disulfiram,DSF)成本低,高效且安全,是一种有效的铜离子载体,已被证明可以促进癌细胞死亡,包括铜死亡.DSF可以与二价铜离子螯合,产生二乙基二硫代氨基甲酸铜(Cu[DDC]2)复合物,用来抗肿瘤,还可以调节肿瘤多药耐药性(multidrug resistance,MDR).近期双硫仑联合铜在国外展开了丰富的临床试验,并验证了其疗效及安全性.该文就双硫仑联合铜抗肿瘤耐药的应用及机制研究进展进行探讨,为肿瘤耐药的干预提供借鉴.

背景:研究表明双硫仑本身具有抗肿瘤活性,可联合铜(Cu)离子在体内外水平对多种肿瘤发挥抑癌作用,但关于双硫仑对骨肉瘤细胞增殖和凋亡作用的影响尚未阐明.目的:探讨双硫仑-Cu在体内外水平对骨肉瘤增殖与凋亡能力的影响以及可能的作用机制.方法:实验方案经山西医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为2017LL077).①体外实验:配置双硫仑在进入人体后的转换物二乙基二硫代氨基甲酸钠(diethyldithiocarbamate,DDTC)和Cu离子的复合物DDTC-Cu(0.5,1,2,3和5μmol/L),设置DDTC单药(5μmol/L)、Cu单药(5μmol/L)和空白对照组.药物处理人骨肉瘤细胞Saos-2细胞和MG-63细胞,CCK8法检测不同浓度DDTC-Cu对Saos-2细胞和MG-63细胞的增殖抑制作用;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测DDTC-Cu对Saos-2细胞凋亡水平变化;②体内实验:取4周龄BALB/c-nu/nu雌性裸鼠共10只,随机分为DDTC-Cu组和对照组.采用异位移植方法,在裸鼠右侧背部皮下注射Saos-2细胞和Matrigel混悬液(1:1混合),注射量400μL/只;接种2周后,对照组裸鼠腹腔注射地塞米松(0.5 mg/kg,隔日1次),DDTC-Cu组裸鼠腹腔注射地塞米松(0.5 mg/kg,隔日1次)和DDTC-Cu复合物(10 nmol/g,隔日1次);观察两组荷瘤小鼠移植瘤生长情况,绘制瘤体生长曲线.接种5周后麻醉下处死动物,完整取出瘤体,免疫组织化学检测瘤体石蜡切片组织中ki67蛋白的表达水平,Western blot检测瘤体组织中细胞增殖和凋亡蛋白的表达及JNK通路蛋白表达的变化.结果与结论:①体外实验结果:DDTC-Cu组对骨肉瘤细胞的增殖抑制作用明显高于其他3组;CCK-8实验结果显示DDTC-Cu对骨肉瘤细胞增殖抑制呈剂量依赖性,两株细胞的24 h药物半抑制浓度分别为0.337μmol/L和0.487μmol/L;流式细胞学检测结果显示DDTC-Cu可呈剂量依赖性促进Saos-2细胞的凋亡;②体内实验结果:DDTC-Cu组裸鼠移植瘤的体积和质量均小于对照组;免疫组织化学结果显示,DDTC-Cu组的瘤体中ki-67蛋白表达水平较对照组降低;Western blot检测结果显示,DDTC-Cu组瘤体蛋白中p-JNK和c-jun的表达水平均上调.结果提示,双硫仑联合Cu离子在体内外水平抑制人骨肉瘤细胞增殖并促进骨肉瘤细胞凋亡,其作用机制可能与JNK通路活化有关.

目的 研究双硫仑/铜复合物二乙基二硫代氨基甲酸铜[copper(Ⅱ)diethyldithiocarbamate,CuET]对肝癌细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 用不同浓度(0、0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00 μmol/L)的CuET处理,CuET(2.00 μmol/L)作用不同时间(0、3、6、9、12、24 h)或Drp1线粒体转位的选择性抑制剂Mdivi-1(1.00 μmol/L)预处理肝癌细胞HepG2、SMMC-7721后,MTT实验检测细胞存活率,软琼脂克隆形成实验确定集落形成,流式细胞术分析细胞凋亡,激光共聚焦检测Drp1线粒体转位,Western blot检测细胞凋亡的相关蛋白cleaved-Caspase 9、cleaved-Caspase 3、cleaved-PARP 1、细胞色素C(cytochrome C,cyto C),以及线粒体分裂蛋白phospho-Drp1(S637)、phospho-Drp1(S616)和Drp1的表达.结果 CuET对HepG2和SMMC-7721细胞增殖和集落形成的抑制作用呈剂量依赖性(P＜0.01);对HepG2和SMMC-7721细胞凋亡诱导作用也有明显的剂量和时间依赖性(P＜0.01);Western blot检测结果显示,CuET可导致Caspase 3 和Caspase 9的裂解激活,PARP的降解激活以及cyto C从线粒体向细胞质的释放.CuET处理可导致Drp1(S637)去磷酸化和Drp1线粒体转位.细胞经Mdivi-1预处理后可明显阻断CuET诱导的Drp1线粒体转位、Caspase 3的裂解/激活、cyto C的释放以及细胞凋亡.结论 双硫仑/铜复合物通过Drp1去磷酸化和线粒体转位抑制肝癌细胞增殖并诱导细胞发生凋亡.