目的 探讨醌型二氢生物喋呤还原酶(QDPR)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾间质纤维化中的作用及对Beclin1 的影响.方法 通过单侧输尿管结扎的方法构建UUO模型,Masson、COL Ⅰ染色和Western blot技术分析纤维化进展及QDPR和Beclin1 的表达情况.慢病毒输尿管逆行注射构建过表达QDPR基因和空载对照UUO模型,评估慢病毒感染效率和QDPR表达情况,并检测QDPR过表达对纤维化进展和Beclin1 表达的影响.结果 UUO模型组较假手术组的胶原纤维表达水平增高(P<0.05),QDPR表达水平降低(P<0.05),Beclin1 表达增高(P<0.05).通过输尿管逆行注射慢病毒,成功感染肾脏,并能增加肾脏QDPR表达.过表达 QDPR 后,胶原纤维表达水平降低(P<0.05),且Beclin1 表达水平下降(P<0.05).结论 过表达QDPR抑制了Beclin1 的表达水平,改善了纤维化的进展,提示过表达QDPR可能通过抑制Beclin1 进而抑制肾间质纤维化.

目的 探讨二氢生物喋呤还原酶(QDPR)高表达对脂肪酸(PA)诱导的细胞凋亡的作用.方法 HEK293T细胞转染实验分为A、B、C 3组,A组为空载体转染组,B组为经过PA刺激的空载体转染组,C组为经过PA刺激的QDPR重组质粒转染组.首先将空载体及构建的QDPR重组质粒分别转染至HEK293T细胞,培养24 h后采用0. 5 mmol/L PA刺激上述细胞,将没有经过PA刺激的空载体组细胞、PA刺激的空载体组细胞和PA刺激QDPR重组质粒组细胞三组细胞继续培养24 h后收集细胞.采用四氢生物喋呤(BH4)和活性氧簇(ROS)检测试剂盒检测3组BH4和ROS的生成量;采用Western blot法检测3组凋亡相关蛋白Beclin 1 、Caspase 3和Beclin 2的表达.结果 ①转染细胞后,QD-PR融合蛋白成功表达;②与A组相比,B组的BH4生成量差异无统计学意义;与B组相比,C组BH4生成量明显增多(P<0.05);③与A组相比,B组的ROS生成量明显增加(P<0.05);与B组相比,C组ROS生成量明显下降(P<0. 05);④Western blot结果显示:与A组相比,B组经过PA刺激后细胞中Beclin 1和Caspase 3表达水平显著上调(P< 0.05),Beclin 2表达水平下降(P<0. 05);QDPR过表达后C组Beclin 1和Caspase 3表达水平显著下调(P<0. 05) , Beclin 2表达水平升高(P<0.05).结论 QDPR高表达后,可以刺激BH4的生成,同时能降低PA诱导的ROS的生成量,还可以降低细胞凋亡相关蛋白Beclin 1和Caspase 3的表达,增强抗凋亡蛋白Beclin 2的表达,提示其可能通过调节 BH4和ROS含量影响细胞凋亡.

目的 探讨醌型二氢生物喋呤还原酶(Quinoid dihydropteridine reductase,QDPR)基因改变对高糖环境下肾小管上皮细胞系NRK-52Eα-辅肌动蛋白(α-actinin)的影响及其在糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)中的可能作用机制.方法 Western-blot检测DN动物(OLETF大鼠)以及对照LETO大鼠肾皮质的α-actinin蛋白含量.构建过表达及敲低QDPR基因的NRK-52E及其对照模型,分别给予正常糖(5.4mmol/L)和高糖(30mmol/L)培养基培养72h,Western-blot检测α-actinin在细胞模型各组的表达水平.结果 OLETF大鼠肾皮质内α-actinin含量降低[(0.86±0.32) vs (0.31±0.22),P＜0.01];NRK-52E高糖组的α-actinin含量降低[(0.80±0.13) vs (0.44±0.10),P＜0.05];与空载过表达病毒对照组(0.66±0.04)比,空载过表达病毒对照高糖组(0.42±0.06)及QDPR基因过表达组(0.49±0.06)的α-actinin蛋白表达含量降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与QDPR基因过表达组相比,QDPR基因过表达高糖组的α-actinin含量降低[(0.49±0.06) vs (0.21±0.02),P＜0.05];与空载过表达病毒对照高糖组比,QDPR基因过表达高糖组的α-actinin含量降低[(0.42±0.06) vs (0.21±0.02),P＜0.05];与敲低随机序列对照组比,敲低随机序列对照高糖组的α-actinin降低[(0.93±0.09) vs(0.69±0.08),P＜0.05];敲低QDPR基因不影响α-actinin蛋白表达量.结论 α-actinin在DN模型中含量减少,QDPR基因可能通过α-actinin影响DN的发生、发展.