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嗜热真菌多糖单加氧酶的克隆表达及氧化产物初步鉴定
编辑人员丨2023/8/6
多糖单加氧酶(Polysaccharide monooxygenases,PMOs)是一类含铜氧化酶,在还原型辅因子(如维生素C)存在下可使纤维素分子氧化降解,在纤维素的酶解中起重要作用.本研究克隆5个嗜热真菌PMOs基因,构建pPICZaA-PMO表达载体,电转毕赤酵母GS115进行真核表达,经镍柱纯化获得重组蛋白后对其氧化活性进行探究.用5个PMOs分别处理磷酸膨胀纤维素(PASC),薄层层析法(TLC)鉴定酶解产物主要为纤维二糖到纤维六糖;飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)鉴定结果显示:PMO0810为C4或C6氧化,PMO2033、PMO0154、PMO4983既有C1氧化也有C4或C6氧化,PMO3424未检测到相应的氧化裂解峰.
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编辑人员丨2023/8/6
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产自Aspergillus sp.DLCS-F18的嗜酸嗜热纤维素酶及其酶学性质
编辑人员丨2023/8/5
纤维素酶在饲料、造纸、纺织和纤维素乙醇生产等领域有重要用途,因而备受关注.使用稻草为唯一碳源进行纤维素降解微生物的富集,从云南大理苍山地区的土壤样品中筛选获得1株纤维素降解真菌DLCS-F18,其适宜生长温度为15-40℃、pH 2.0-13.0.通过形态学和ITS rRNA分子生物学鉴定,菌株DLCS-F18被鉴定为曲霉属菌株Aspergillus sp..使用稻草发酵培养基进行诱导,发现该菌株所产纤维素酶的最适pH为4.0,最适温度为65℃,在pH 3.0保持85％的活性,在75℃保持70％以上的活性,在大多数金属离子和酶抑制剂存在的条件下活性表现稳定.菌株发酵84h的上清对羧甲基纤维素钠(CMC-Na)的最高活性为(5.4±0.2)U/mL.这说明DLCS-F18所分泌的纤维素酶是嗜酸嗜热纤维素酶,其酶学特性预示着菌株在木质纤维素水解和动物饲料中具有广阔的应用前景.
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编辑人员丨2023/8/5
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嗜热毛壳菌基因组密码子偏好性研究
编辑人员丨2023/8/5
嗜热毛壳菌具有强大的木质纤维素降解能力,将其开发为优异的重组蛋白表达宿主有着广阔的应用前景.蛋白表达宿主的密码子偏好性对重组蛋白的表达水平具有重大影响.为确定嗜热毛壳菌中密码子的使用模式及影响因素,本研究以6 897条CDS序列为对象,对其进行密码子偏好性分析.结果显示,嗜热毛壳菌中GC3的平均含量为66.2％,高于GC1(59.1％)和GC2(45.6％)的平均含量.Effective number of codon(ENC)分析与中性绘图分析结果显示,自然选择是影响嗜热毛壳菌密码子偏好性的主要因素.相关性分析结果显示,芳香族氨基酸比例与GC1含量及蛋白疏水水平呈极显著相关,说明密码子第一位的碱基组成对氨基酸是否具有芳香性影响较大.此外,在嗜热毛壳菌使用频率较高的密码子中,有24个以G/C末端结尾的密码子,进一步确定了 23个高表达优越密码子和1个高表达最优密码子(CGC).通过与其他模式真菌的密码子偏好性进行比较发现:与嗜热毛壳菌在密码子使用频率上差异较小的为嗜热毁丝菌、粗糙脉孢霉,有显著差异的为酿酒酵母.本研究为在嗜热毛壳菌中异源表达重组蛋白提供了 目标基因密码子优化的理论依据,为嗜热毛壳菌在基因组水平上的应用和研究提供了数据支撑,有助于开发高效嗜热丝状真菌表达系统应用于工业酶制剂的生产.
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编辑人员丨2023/8/5
