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小干扰RNA-Pax6对人晶状体上皮细胞生物学行为和上皮-间质转化的抑制作用
编辑人员丨1周前
目的:探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法:将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组,siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6,siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率;转染后48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例;转染后24 h,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率;转染后48 h,采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。结果:2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义( F分组=4.776, P<0.05; F时间=13.535, P<0.05),其中转染后48 h和72 h,siRNA-Pax6组细胞存活率均明显低于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与siRNA-NC组比较,siRNA-Pax6组G 0/G 1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,差异均有统计学意义( t=9.971、-5.063,均 P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞迁移率为(19.73±6.07)%,低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%,差异有统计学意义( t=-7.245, P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组,E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义( t=-23.254、-5.294、6.062,均 P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义( t=5.521、8.270,均 P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01,低于siRNA-NC组的1.00±0.05,差异有统计学意义( t=-14.456, P<0.001);siRNA-Pax6组细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05,低于siRNA-NC组的1.14±0.10,差异有统计学意义( t=-4.458, P<0.001)。 结论:沉默Pax6可抑制人LECs的增生及EMT过程,维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。
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编辑人员丨1周前
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EB病毒阴性胃淋巴上皮瘤样癌1例并文献复习
编辑人员丨2023/12/2
回顾性分析1例胃淋巴上皮瘤样癌(lymphoepithelioma-like gastric carcinoma,LELGC)患者的临床病理特点并复习相关文献.本例患者因剑突下疼痛入院,外院胃镜提示胃窦部巨大溃疡,入院增强CT提示胃窦部胃壁增厚并明显强化,考虑胃窦部恶性肿瘤,行根治性手术切除.术后病理检查提示:远端胃可见一大小约为4.5 cm×5.5 cm×1.0 cm的溃疡型肿物,似侵及深肌层.特殊染色结果示幽门螺杆菌阳性.原位杂交结果示Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码区阴性.免疫组织化学染色示广谱细胞角蛋白、表皮生长因子受体、P53(野生型)、上皮膜抗原、细胞黏附分子、黏蛋白(mucin,MUC)-6均为阳性,细胞增殖的相关抗原Ki-67为60%阳性,淋巴细胞共同抗原和CD3均为部分阳性,人髓细胞增生原癌基因、细胞周期蛋白D1和CD5均为弱阳性,人类表皮生长因子受体-2、D20、CD10、多发性骨髓瘤癌基因1、CD79a、B细胞白血病/淋巴瘤(B-cell leukemia/lymphoma,BCL)-2、BCL-6、CD56、间变性淋巴瘤激酶、配对盒蛋白5、突触素、嗜铬粒蛋白A、CD8、波形蛋白、黑色素瘤相关抗原HMB45、黑色素A、神经特异性蛋白质S-100、SOX10、E-钙黏蛋白、尾侧型同源盒转录因子-2、MUC-5ac、MUC-2均为阴性.苏木精-伊红染色结果示:肿瘤细胞核分裂活跃,可见病理性核分裂象.通过文献复习发现,80%以上的LELGC患者与EBV感染相关,早期LELGC主要通过内镜黏膜下剥离或根治性切除术治疗,而晚期患者多采用姑息性治疗.LELGC患者过度表达程序性死亡受体配体1,这表明程序性死亡受体1/程序性死亡受体配体1抑制剂可作为LELGC的潜在治疗靶点,具有广阔的治疗前景.
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编辑人员丨2023/12/2
