目的 设计一种新型混合型生物人工肝(HBAL)并通过对模拟肝衰竭血清的净化作用评价其疗效,探讨其临床应用的可行性.方法 选用中国人肝细胞株-1(CL-1)作为肝细胞供体,在微重力环境下,肝细胞微载体共培养方法培养至第5天,细胞总量约4.0×109个,细胞密度约为4.0×1010/L,在无菌环境下灌人自制生物反应器中,制成生物部分,非生物部分采用血液灌流+胆红素吸附,生物部分和非生物部分通过两套聚乙烯胶管构成一个封闭的环路,监测模拟肝衰竭血清中未结合胆红素、鹅去氧胆酸,胆酸、血氨经过HBAL循环后浓度的变化以及生物反应器中肝细胞功能、形态及肝细胞活性的变化.结果 整个治疗过程中循环前24h内,模拟肝衰竭血清中未结合胆红素(UBD)、鹅去氧胆酸(CDCD),胆酸(CA)和血氨(AA)的浓度分别从(335.3±6.0)、(395.0±5.6)、(155.7±4.5)、(39.0±2.6)μmol/L下降至(106.0±10.9)、(131.8±28.7)、(42.2±7.3)、(3.5±1.0)μmol/L,与0h比较差异有统计学意义(P=0.041),24h后浓度下降趋于平稳;循环48h后,CL-1细胞功能发生变化,生物反应器中模拟肝衰竭血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)分别从(25.9±4.2)IU/L、(22.0±3.6) IU/L、(0.28±0.09) μmol/L升高至(31.0±2.6) IU/L、(31.6±8.0)IU/L、(0.41 ±0.12) μ.mol/L,与0h比较差异有统计学意义(P=0.027);并且整个反应器中肝细胞的数量和活力在循环48 h后也呈现显著性下降(P=0.044).结论 (1)构建了一种新型灌流型生物反应器,该生物反应器中的CL-1细胞能够保持较高的活性和良好的功能.(2)新型混合生物型人肝可以显著降低模拟肝衰竭血清中的未结合胆红素、鹅去氧胆酸,胆酸、血氨的浓度,具有清除这些毒性物质的功能,提示其具有明显的肝功能支持作用.

目的 利用生物反应器低血清培养基灌流培养猪瘟病毒,制备猪瘟病毒活疫苗,检测其免疫效价.方法 对猪睾丸ST细胞进行低血清培养驯化,待ST细胞适应低血清培养后,接种至生物反应器,当细胞达到接种密度后,感染猪瘟兔化弱毒株(Classical Swine)毒种,培养96 h后,连续收液48 d,收获的病毒液经滤膜过滤后,制备猪瘟病毒活疫苗.将疫苗免疫健康新西兰家兔和28日龄健康仔猪,检测病毒滴度及免疫效价.结果 用2％血清培养ST细胞,细胞接毒密度为5×106个/mL,病毒按3％～5％比例接种.利用上述条件培养的猪瘟病毒连续收获20次,病毒滴度均在7 500 RID/mL以上.免疫仔猪后第14天抗体效价达1∶128,未免疫仔猪抗体效价低于1∶16;攻毒后观察16d,免疫仔猪无任何猪瘟临床表现,保护率100％,而未免疫仔猪在攻毒后第6天开始陆续死亡,死亡率100％.结论 用低血清培养ST细胞制备的猪瘟病毒活疫苗具有较高的免疫效价,为猪瘟病毒疫苗生产工艺的改进奠定了基础.

目的 采用Vero细胞生物反应器微载体无血清培养甲型流感病毒.方法 将Vero细胞分别采用无血清和有血清培养基于生物反应器(pH 7.2,温度37 C,溶氧量50％,转数60 r/min)中培养24 h,均用无血清培养基进行灌流培养至7 d,进行计数,并按MOI=0.1接种H1N1型流感病毒,加入终浓度为1 μg/mL的TPCK-胰酶,于生物反应器(pH7.8,温度33.0℃,溶氧量25％,转数60r/min)中培养18、22、42、48、66h,取样,检测血凝效价.结果 Vero细胞经无血清和有血清培养基培养7 d的细胞数分别为(133.4±2.0)x 104和(193.8±1.3)x 104个/mL,接种H1N1流感病毒66 h后血凝效价几何平均数分别为1∶388和1∶675,前者细胞数及病毒血凝效价几何平均数均显著低于后者(t分别为7.068和4.332,P均＜0.05).结论 采用Vero细胞通过生物反应器微载体无血清培养H1N1型流感病毒的血凝效价可满足流感病毒裂解疫苗制备的要求.