目的:研究中药制剂牛黄清感胶囊对新型冠状病毒的抑制作用，可为药物筛选和新冠肺炎治疗提供实验依据。方法:用Vero-E6细胞分离和培养新型冠状病毒GS048株，制备的牛黄清感胶囊溶液体外与新冠病毒共孵育后测定病毒滴度改变；将含有药物的培养液作用于新型冠状病毒接种的细胞，测定牛黄清感胶囊溶液在细胞培养中对新型冠状病毒增殖的抑制作用。结果:实验发现药物浓度低于274.3 μg/ml时对细胞无毒害作用，药物和新型冠状病毒共孵育后可使病毒滴度从10 4.4TCID 50/ml下降至10 2.8TCID 50/ml；体外新冠病毒细胞培养实验中，加入药物使细胞病变数减少，病毒滴度对数值下降了40%~50%。 结论:牛黄清感胶囊在体外具有部分抑制新冠病毒的能力，可作为候选药物进一步验证对新冠肺炎的治疗作用。

目的 建立小儿氨酚黄那敏颗粒中人工牛黄的质量控制及抽验质量评价方法.方法 该药物TLC鉴别采用硅胶G薄层板,以冰醋酸-乙酸乙酯-异辛烷(5∶7∶15)为展开剂,点样薄层板凉干后,喷以10％硫酸乙醇溶液,在105℃下加热至有斑点出现,在紫外灯(365 nm)下检视.该药物的分析采用Waters XterralC18色谱柱(150 mm× 4.6 mm,5 μm);流动相甲醇-三氯甲烷-1％磷酸(81∶13∶6);柱温30℃;体积流量1.0 mL/min;检测波长449 nm.结果 胆酸、猪去氧胆酸、去氧胆酸TLC特征斑点清晰,分离度好.胆红素在1～32 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 4),平均加样回收率99.5％,RSD1.1％.添加人工牛黄的248批制剂中,胆红素含量为每袋7.1～40.4 μg.以胆红素不得少于每袋26 μg计算,合格率约为22.6％.9批人工牛黄中,胆红素平均含量约为0.163 0 μg/mg,人工牛黄、体外培育牛黄与牛黄对照药材的扫描电镜图谱结构均有一定差异.结论 该方法简便,专属性强,可用于小儿氨酚黄那敏制剂中牛黄的质量控制.

目的 首次将共培养体系及混合腹水技术应用于急性胰腺炎腺泡细胞凋亡/坏死体外模型,并与常见的雨蛙素及雨蛙素联合脂多糖(LPS)模型进行对比研究,以观察其改良效果.方法 体外培养的大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J分为4组:对照组(培养液+PBS),雨蛙素组(培养液+10 nmol/L雨蛙素),雨蛙素+LPS组(培养液+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L LPS)及改良腹水组.改良腹水组采用牛黄胆酸钠诱导的重症急性胰腺炎动物模型腹水,混合后加入共培养体系,刺激体外培养的同源腺泡细胞造模.共培养体系的设置为:培养板中置入孔径为1μm的小室,以体积比1∶1于孔板和小室中分别加入培养液及混合腹水.各组刺激24 h后收集腺泡细胞,采用流式细胞术检测腺泡细胞的凋亡/坏死率,Western blot检测凋亡/坏死相关蛋白B淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、受体相互作用蛋白1(RIP1)的表达情况,透射电镜观察腺泡细胞的亚显微结构.结果 改良腹水模型中腺泡细胞以坏死特征为主,与其余3组相比,其凋亡率及坏死率均上调,RIP1及BAX蛋白表达水平上调,而Bcl-2蛋白呈下调趋势.透射电镜结果显示改良腹水组腺泡细胞细胞器结构破坏,细胞膜降解.而雨蛙素及雨蛙素+LPS模型与对照组相比,腺泡细胞凋亡率上调,坏死率无改变;促凋亡蛋白Bax表达升高,而RIP1蛋白的表达水平无显著上调.透射电镜结果显示雨蛙素及雨蛙素+ LPS组细胞染色质固缩成团,胞质降解,细胞膜完整,呈现出典型的凋亡特征.结论 相较于以腺泡细胞凋亡特征为主、研究轻症急性胰腺炎的雨蛙素及雨蛙素+ LPS模型,改良的腹水模型以腺泡细胞的坏死特征为主,是研究腺泡细胞坏死及重症急性胰腺炎的良好模型.

背景:研究表明大黄游离蒽醌能够保护肠黏膜细胞结构和功能的稳定, 但尚未有将其与脂肪干细胞联合治疗大鼠急性胰腺炎的报道.目的:观察并探讨大黄游离蒽对脂肪干细胞移植治疗大鼠急性胰腺炎的影响及其机制.方法:体外快速复苏并培养购自中国医学科学院的冻存鼠脂肪干细胞, 随后采用MTT比色法测定脂肪干细胞的细胞存活率并行PKH-26标记.将北京维通利华动物实验技术有限公司提供的SD大鼠随机平均分为4组, 病理模型组大鼠采用肠壁穿刺逆行胰胆管注射体积分数5％牛黄胆酸钠建立急性胰腺炎病理模型, 然后尾静脉注射0.5 mL的L-DMEM完全培养液;大黄游离蒽组建模后给予大黄游离蒽醌200 mg/kg灌胃;脂肪干细胞组建模后尾静脉注射0.5 mL细胞浓度1×107 L-1脂肪干细胞;联合治疗组建模后同时给予以上2种干预.各个实验组中所有干预治疗措施每日进行1次且连续治疗3 d.结果与结论: (1) 与理模型组的大鼠相比, 大黄游离蒽醌组和脂肪干细胞组大鼠血清淀粉酶活性以及白细胞介素6水平显著降低 (P <0.05), 胰蛋白酶原激活肽水平显著升高 (P <0.05);经过脂肪干细胞移植和大黄游离蒽醌灌胃处理联合治疗, 上述3指标水平较大黄游离蒽醌组和脂肪干细胞组进一步降低 (P<0.05); (2) 苏木精-伊红染色结果显示, 此2个单独治疗组大鼠胰腺组织中脂肪变性、出血、细胞坏死及炎症细胞浸润等病理变化程度均有明显减轻, 联合治疗组中大鼠的病理变化的缓解程度则更为明显; (3) 荧光显微镜下观察可见, PKH-26标记的阳性细胞数联合治疗组最多, 脂肪干细胞组次之, 而在大黄游离蒽组及病理模型组则未见 (P <0.05); (4) TUNEL法检测可见, 与病理模型组比较, 2个单独治疗组中胰腺组织中的细胞凋亡数明显降低, 联合治疗组进一步降低 (P <0.01); (5) RT-PCR和Western blot法检测显示, 病理模型组大鼠胰腺组织转化生长因子β1及Smad2/3基因和蛋白表达最高, 联合治疗组最低 (P <0.01), 而2个单独干预组均较病理模型组显著较低 (P <0.05); (6) 结果证实, 大黄游离蒽干预联合脂肪干细胞移植治疗大鼠急性胰腺炎可以有效改善模型大鼠急性胰腺炎的血液生化指标水平;并可明显地缓解急性胰腺炎模型大鼠炎症反应程度和胰腺组织形态学病变以及胰腺细胞的凋亡, 这可能与降低转化生长因子β/Smad信号通路有关.

目的 探讨白藜芦醇治疗大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的效果及其机制.方法 80只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组和治疗组,每组20只.模型组和治疗组采用逆行胆管注射3％牛黄胆酸钠1 mL/kg建立SAP大鼠模型,治疗组造模成功后12h,腹腔注射白藜芦醇30 mg/kg治疗.3d后处死各组大鼠,检测血清脂肪酶和淀粉酶水平,同时对胰腺组织进行HE染色,评估胰腺组织的损伤.采用免疫组化染色观察胰腺组织中血管内皮生长因子A(VEGF-A)、血管内皮生长因子受体2 (VEGFR2)以及血管内皮细胞表面分子CD31的表达.另取人脐静脉内皮细胞分为两组行体外培养:给药组加入白藜芦醇(40 mmol/L),对照组不加药物,观察体外血管形成情况.结果 与空白对照组和假手术组比较,模型组血清淀粉酶、脂肪酶水平以及组织病理评分升高(P＜0.05);治疗组上述指标低予模型组(P＜0.05).免疫组化染色结果显示,与空白对照组和假手术组比较,模型组CD31、VEGF-A和VEGFR2阳性表达减少;治疗组上述指标阳性表达较模型组增多.人脐静脉内皮细胞体外试验显示,给药组人脐静脉细胞血管形成数量多于对照组(P＜0.05).结论 白藜芦醇对大鼠SAP有一定的治疗作用,其对胰腺损伤血管的修复可能是其机制之一.