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中国人群中RHAG变异对mRNA剪接影响的体外研究
编辑人员丨2024/1/13
目的 通过mRNA异常剪接体外验证实验,即体外微基因剪接系统(minigene splicing assay,MSA),研究中国人群中发现的RHAG突变对于RHAG基因mRNA剪接的影响.方法 通过对KMxD数据库中RHAG基因数据的分析,选择 10 种中国人群中分布频率相对较高的位于RHAG基因剪接位点附近的突变或编码区域的同义突变,构建相应的RHAG外显子野生型及突变型pSplice POLR2G微基因表达质粒.转染HEK-293T细胞,48h后收集细胞提取总RNA,反转录后进行PCR扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳检测和毛细管电泳检测,根据实验结果判断RHAG基因突变是否会影响相应外显子的正常剪接.结果 2 种RHAG基因剪接位点附近突变(c.158-5delT,c.807+3A＞C)轻微减弱了原剪接位点的剪接效率,其余 8 种突变(c.312G＞A,c.341+3G＞A,c.609C＞T,c.681G＞A,c.861G＞A,c.957T＞A,c.984T＞C和 c.1139-7G＞A)均不影响RHAG基因mRNA的剪接.结论 RHAG基因在剪接方面比较保守,剪接位点附近突变及编码区同义突变较少会引起RHAG基因异常剪接.
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编辑人员丨2024/1/13
