目的 探讨将全飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术中获得的角膜基质透镜用于周边板层角膜移植的方法和技术以及移植术后的结果.方法 新西兰白兔10只均分为A、B两组,每组均采用右眼为实验眼,12点至3点钟方位制作周边角膜基质缺损模型.A组采用单纯折叠的方法,B组将纤维蛋白胶涂布于折叠好的透镜组织层间的方法构建板层角膜移植片.A组用10-0尼龙线直接将构建好的板层角膜移植片缝合到右眼植床,而B组则采用纤维蛋白胶将构建好的板层角膜移植片粘合于右眼植床,再用10-0尼龙线缝合.术后观察移植片表面平整度、角膜上皮化完成和维持情况、周边角膜形态、植床和移植片的吻合度、移植片的透明度等指标.观察期末行组织病理学检查.结果 两组术后3～5d上皮化均完成,且移植片表面平整,移植片和植床吻合度佳.A组5眼中有4眼移植片均出现新生血管长入,轻、中度水肿混浊,但1个月之后移植片完全透明,新生血管完全消退;A组另1眼在术后10d出现强烈的排斥反应,予眼球摘除.而B组在术后早期5眼中即有4眼移植片发生强烈的异种排斥反应,予眼球摘除;而另1眼的发展过程类似A组4眼,最终移植片完全透明.观察期末组织病理学检查发现A组4眼和B组1眼最终保持透明的移植片内为正常的角膜基质细胞,透镜层间融合良好,植床和移植片交界处有少许散在单核淋巴细胞和成纤维细胞;A组1眼和B组4眼出现类似化脓样的白色浸润病灶,有大量堆积的单核淋巴细胞在透镜层间和表面,并在移植片表面出现组织坏死脱落.结论 利用飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术中获得的角膜基质透镜经冰冻保存后用于构建周边板层角膜移植片,并将其用于周边板层角膜移植术是可行有效的,因纤维蛋白胶来源于人纤维蛋白可增加异种排斥反应.

目的:观察结膜下注射复方倍他米松对鸵鸟-兔眼板层角膜移植术后免疫排斥反应的缓释治疗作用.方法:16只6周龄健康新西兰白兔角膜(单眼)行板层角膜移植术,植片应用鸵鸟脱细胞的角膜基质,术后分成两组,实验组术毕及术后结膜下注射复方倍他米松注射液(每隔7d一次),对照组术毕及术后结膜下注射地塞米松磷酸钠注射液(每隔7d一次).分别于术后1、2wk,1、2mo取兔角膜组织做石蜡包埋切片,进行HE染色观察组织特点,同时进行间接免疫荧光法检测CD4+、CD8+T淋巴细胞的变化.结果:术后2mo,实验组角膜植片在位,并保持透明,新生血管极少,组织切片HE染色和间接免疫荧光染色结果显示,仅见少许中性粒细胞浸润,未见CD4+、CD8+T淋巴细胞;对照组炎症反应明显,角膜植片混浊,组织切片HE染色和间接免疫荧光染色结果显示,炎性反应以中性粒细胞浸润为主,可见CD4+、CD8+T淋巴细胞.结论:复方倍他米松作为长效缓释剂可有效抑制鸵鸟-兔板层角膜移植术后免疫排斥反应,延长植片的存活时间.

目的 应用壳聚糖(chitosan,CS)和蚕丝蛋白(silk fibroin,SF)构建组织工程角膜基质,探讨不同比例的CS和SF共混膜的生物特性,为以后的角膜移植奠定基础.方法 将SF和CS按体积比31和41混合,体外构建具有相应器官特征的角膜基质层;体外培养原代兔角膜基质及上皮细胞,检测细胞分布情况和载体膜片的物理特性;免疫组织化学法测定细胞表型和分布情况,CCK-8试剂盒测定载体膜片毒性,电镜下观察细胞结构形态和附着情况,将构建的膜片植入兔板层角膜中检测组织生物相容性.结果 载体膜片的吸水率均在90％左右,明显强于天然角膜,抗拉力SF/CS 31组为0.90±0.02,SF/CS 41组为1.30±0.05,透光率均大于60％,且抗拉力和透光率随着CS含量增加而增强,但与天然角膜组织间仍存在差异.与载体膜片共培养的细胞在培养2周后,电镜下可见膜片上形成致密的细胞层,重构的板层角膜结构与天然角膜相似.CCK-8法检测结果显示,合成膜无明显毒性.免疫组织化学染色结果显示,培养出的基质细胞形态与天然角膜相似.动物板层移植术后,裂隙灯观察载体膜片组术后半个月内充血消失,无明显的前房炎症反应,术后1个月拆线时无明显新生血管.免疫组织化学法检测术后病理组织未发现CD4+、CD8+、CD31+T细胞浸润.结论 CS-SF可以用于组织工程角膜基质的构建,这为重建角膜基质提供了方向.

目的 进行体外分离和培养兔角膜缘干细胞,使之成为一种上皮组织,以便进行角膜移植.方法 组织块法体外培养兔角膜缘干细胞:角膜缘组织块作为外植体,在脱细胞猪角膜基质上培养;获得的复合角膜上皮组织移植于兔眼,观察并记录兔角膜组织生长情况,待角膜组织生长良好后做免疫组织化学鉴定.结果 兔角膜缘组织应用组织块法在脱细胞角膜基质上生长9～10 d后达到80％汇合状态,显微镜下动态观察细胞生长良好,增殖能力较高,将组织工程化角膜上皮作异体板层角膜移植于兔眼后,4～5 d角膜上皮光滑,20～21 d角膜变为透明,荧光素染色只见缝线处少许着色,期间未见角膜移植排斥反应.术后30 d HE染色显示角膜组织与宿主角膜组织结合良好,上皮细胞可见4～5层结构,可见角膜缘干细胞多呈卵圆形;免疫荧光染色可见培养的细胞P63、CK3单克隆抗体呈阳性表达.结论 以组织块法生长的以脱细胞角膜基质为载体的组织工程化兔角膜可在角膜缘干细胞缺乏的兔眼上生长良好.

目的:研究纤维蛋白粘合剂(FS)粘贴的双层角膜基质透镜体内生物相容性,探讨使用该种材料行角膜移植的可行性.方法:选取健康清洁级新西兰白兔15只,采用自身对照,以兔右眼为实验眼,左眼为对照眼.实验眼使用FS粘贴的双层角膜基质透镜作为移植材料行板层角膜移植手术,对照眼不进行人工干预.分别于术后7、14、28d使用手持裂隙灯观察双眼角膜情况,并进行生物相容性评分,同时取双眼角膜行HE染色进行组织病理学检测,观察角膜恢复情况.结果:裂隙灯观察结果显示,至角膜移植术后28d,实验眼角膜上皮生长情况良好,角膜透明度基本恢复,水肿程度减轻,新生血管生长至角膜缘后未加重,未见上皮、内皮排斥线等排斥反应;对照眼角膜透明,角膜上皮光滑.生物相容性评分结果显示,角膜移植术后实验眼角膜植片水肿程度逐渐减轻,透明度逐渐恢复,排斥反应较小,角膜植片的生物相容性较好;至术后28d,实验眼和对照眼角膜透明度、水肿程度及新生血管生长程度均无差异(P>0.01).组织病理学检测结果显示,至角膜移植术后28d,实验眼植片表面有4～5层角膜上皮细胞覆盖,角膜胶原排列整齐、规则,植片内未见明显炎性细胞浸润,双片透镜间分界消失,层间FS被机体完全吸收,植片与植床融合,未见明显分界.结论:使用FS粘贴的双层角膜基质透镜作为植片行板层角膜移植术后恢复较好,排斥反应较小,生物相容性较好,可用于板层角膜移植.