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基于全合成纳米抗体库的黄曲霉毒素B1抗体制备
编辑人员丨2024/8/10
目的 利用全合成纳米抗体库筛选制备黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的纳米抗体.方法 制备AFB1完全抗原并依托全合成纳米抗体库进行4轮筛选,将捕获的高亲和力抗体基因转化至原核表达系统表达,分析纯化后的抗体特异性及亲和力,并构建抗体G5-AFB1复合三维结构,分析二者的结合特点.结果 在AFB1完全抗原制备基础上筛选,随着轮数的增加,特异性噬菌体明显富集,最终获得一株阳性单克隆G5,经鉴定,其半数效应浓度(effec-tive concentration 50％,EC50)为 0.953 μmol/L,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为 43 μmol/L.另外,G5-AFB1复合物不仅形成了稳定的氢键,也具备较好的疏水和静电作用.结论 通过全合成纳米抗体库可以筛选出良好的AFB1抗体,为AFB1检测与治疗提供了良好基础,也证实了噬菌体展示技术以及全合成纳米抗体库在小分子生物毒素抗体制备中具有较大的发展潜力.
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编辑人员丨2024/8/10
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全合成噬菌体展示抗体库淘筛策略与多样性分析
编辑人员丨2023/8/6
大容量全合成噬菌体展示抗体库可用于针对特异靶点生产高亲和力抗体,是重要的单克隆抗体来源,其中亲和淘筛策略是影响抗体筛选效果的关键.亲和淘筛中的多样性损失会降低高亲和力抗体获得概率,为探究亲和淘筛多样性损失最小的筛选策略,分别以PCSK9,CD20为靶点,用全合成噬菌体展示抗体库淘筛,通过滴度测定与测序分析比较首轮淘筛中酸洗脱与宿主菌直接感染所得洗脱物的框架与多样性差异.同时采取直接液体扩增、刮板后液体扩增,以及30、37℃两种扩增温度探究不同扩增条件对次级库框架分布的影响.最佳淘筛方法效果通过PCSK9,CD20多轮淘筛后的单克隆phage-Elisa结果验证.研究结果表明合并酸洗脱与宿主菌洗脱噬菌体,30℃直接液体扩增可以使合成库首轮淘筛多样性损失最低,采用此法获得了靶向PCSK9与CD20的阳性序列.最终开发了一种保留全合成噬菌体抗体库多样性效果好、实验周期短的淘筛方法.可供全合成噬菌体抗体库进行高效的抗体筛选,有效推进了抗体药物早期发现进程.
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编辑人员丨2023/8/6
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噬菌体库中小分子生物毒素抗体筛选策略优化的研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 验证采用不同洗脱策略从非特异性人工合成噬菌体抗体库中获取小分子生物毒素抗体的特异性,以优化筛选手段.方法 制备石房蛤毒素(saxitoxin,STX)、黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)以及T-2毒素3种小分子的完全抗原,依托噬菌体纳米抗体全合成库进行四轮筛选,并在第3、4轮分别采用酸碱洗脱及竞争洗脱两种方式,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析筛选过程中产生的噬菌体上清液特异性并进行统计分析.结果 STX完全抗原与载体蛋白不同波长紫外吸收光下存在差异证明偶联成功,第2轮筛选产生的噬菌体上清液特异性较强,继续使用酸碱洗脱产生的噬菌体上清特异性逐渐丢失,而竞争洗脱后噬菌体上清特异性仍随筛选次数增加而增强,AFB1与T-2毒素完全抗原筛选后特异性表现与STX结果相似.结论 不同洗脱方式对从非特异性噬菌体抗体库中获取小分子生物毒素抗体影响较大,竞争洗脱可能更优于酸碱洗脱.
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编辑人员丨2023/8/5
