传统毛细管电色谱(Capillary electrochromatography,CEC)技术,在实际操作过程中,由于焦耳热的作用容易产生气泡和干柱,从而使电流中断.加压毛细管电色谱(Pressurized capillary electrochromatography,pCEC),将液相色谱中的压力泵和进样阀引入CEC系统中,不仅解决了CEC的易出现气泡、干柱等问题,而且实现了定量阀进样和二元梯度洗脱.pCEC具有液相色谱和电色谱双重机理,既能分离带电物质,也能分离中性物质,具有高柱效,高分辨率,高选择性,快速分离以及低样品和流动相消耗量等优点,近年来在生命科学、生物医药、食品安全、环境保护等领域得到了广泛应用.本文对pCEC的原理、仪器进展、毛细管电色谱柱技术、检测器联用技术进行综述并对pCEC技术的发展和前景做了展望.

目的:采用加压毛细管电色谱法测定复方芦丁片中芦丁与维生素C的含量.方法:采用TrisepTM-2100加压毛细管电色谱仪,以C18毛细管色谱柱(300 mm× 100 μm i.d.,1.8 μm)为固定相,流动相为甲醇-乙腈-0.4％磷酸(18∶70∶12),用三乙胺调节pH值至3.0,总流速为0.05 mL·min-1,检测波长为254 nm.结果:芦丁的线性范围为2.0～20 μg·mL-1(r2=0.999);平均回收率为99.4％,RSD为1.2％(n=9);维生素C的线性范围为2.0～50 μg·mL-1(r2=0.999);平均回收率为99.3％,RSD为1.4％(n=9).另外,本方法与原国标方法进行了比较,结果基本一致.结论:加压毛细管电色谱法可用于复方芦丁片有效成分含量的测定,该方法简单、快速、准确,为复方芦丁片质量控制提供了新检测技术.

目的:本论文使用加压毛细管电色谱-微流蒸发光散射(pCEC-μELSD)联用仪,建立了一种赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇、麦芽糖醇和乳糖醇的分离检测方法.方法:实验采用亲水作用色谱柱,80％乙腈-水(含40 mmol/L三乙胺)为流动相,施加+5KV电压进行分离;蒸发光散射检测器蒸发温度120℃,氮气载气流量0.8 L/min进行检测.结果:实验结果表明,5种糖醇在线性范围内线性关系良好,线性相关系数(r)均大于0.998;3个添加水平下的样品平均回收率在82.4％-107.2％之间,相对标准偏差RSD(n=3)小于4.0％;方法最低检出限(LOD,S/N=3)在4-11 ng之间.结论:该方法对比常规HPLC-ELSD法,分离速度快、重现性好、经济环保,具有较高的实用性,为无糖食品中糖醇的定量检测提供了一种快速且行之有效的方法.

目的:比较不同蒸制时长及压力对6种人参皂苷类成分总量的影响,确定红参的最佳炮制方法.方法:采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QqQ-MS/MS)对不同炮制工艺的红参中人参皂苷Rg1,Re,Rf,Rb1,Rc,Rb2进行含量测定,选择Waters ACQUITY UPLC BEH C8色谱柱(2.1 mm ×100 mm,1.7 μm),流动相0.1％甲酸水溶液(A)-0.1％甲酸乙腈溶液(B)梯度洗脱(0～4 min,81％ ～79％A;4～6.3 min,79％～75％A;6.3～6.5 min,75％～71％A;6.5 ～9.5 min,71％A;9.5 ～16.5 min,71％ ～68.5％A;16.5～16.6 min,68.5％～60％A;16.6～19 min,60％～100％A),流速0.4 mL· min-1,柱温35℃;质谱分析采用电喷雾离子源(ESI),负离子采集模式,毛细管电离电压2.5 kV,脱溶剂气温度350℃,脱溶剂气流量700 L·h-1,锥孔气流量50 L·h-1,以多反应监测(MRM)模式采集,采集范围m/z 100～1500,其中人参皂苷Rg1,Re,Rf,Rb1,Rc,Rb2的定量离子对分别为m/z 799.59～637.49,945.54～475.79,799.59 ～ 475.49,1107.59 ～ 783.97,1077.58～783.96,1077.75～191.19.结果:蒸制时长为3h时,各样品组6种人参皂苷类成分质量分数总和处于7.0998～16.7685 mg·g-1;常压蒸制时6种人参皂苷类成分总量为加压蒸制总和的2.5 ～12.6倍,明显优于加压蒸制.结论:在本实验条件下,红参的最佳炮制方式为鲜人参常压蒸制3h.

目的 真核表达杜拉鲁肽类似药胰高糖素样肽1 (GLP-1)-Fc融合蛋白(27C7),并与杜拉鲁肽进行理化性质比较.方法 构建真核表达载体pCHO1.0-GLP-1-Fc,并用脂质体转染CHO细胞,经甲氨蝶呤和嘌呤霉素加压筛选,再单克隆筛选,得到1株高表达的细胞模型.采用ProteinA亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE检测蛋白大小,质谱仪进行高分辨分子量检测,高效液相色谱法检测蛋白纯度,毛细管等点聚焦电泳(CIEF)检测蛋白等电点,细胞活性功能评价杜拉鲁肽与27C7生物活性的一致性.结果 通过SDS-PAGE、样品高分辨分子量检测,27C7与杜拉鲁肽分子量一致;分子排阻色谱检测27C7与杜拉鲁肽单体纯度接近,CIEF显示27C7与杜拉鲁肽的等电点一致;体外活性检测结果表明,27C7与杜拉鲁肽的生物学活性一致.结论 类似药27C7与杜拉鲁肽具有一定的一致性,可进行下一步的类似药研发工作.