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茯苓原生质体单核化及同核体杂交
编辑人员丨2024/4/6
茯苓Wolfiporia hoelen是一种食药兼用的大型真菌,在我国栽培历史悠久,但由于长期无性繁殖,导致菌种退化,栽培产量下降,严重影响产业发展.为解决茯苓育种的难题,我们前期建立了茯苓同核体鉴定方法,明确了其交配系统,建立了单孢同核体杂交育种体系,但是部分茯苓菌株子实体形成困难或子实体贴生,导致担孢子收集困难,因此原生质体单核化的研究具有重要意义.本研究以两株存在较大遗传差异且同核体类型不同的菌株 776 和 775 为材料,核荧光染色表明超过60%的原生质体具有细胞核,原生质体再生率分别为11.0%和7.6%,不易生长的再生菌株中既有同核也有异核菌株.原生质体单核化获得了两个菌株的同核体菌株,比例可达到10%以上,菌株776 获得了两种交配型的同核体菌株(5:3),不存在偏分离(χ2=0.5),但菌株 775 原生质体单核化仅获得了一种交配型的同核体菌株,表现出严重的交配型偏分离.通过杂交菌株与两亲本对峙试验及基于rpb2 的杂合位点验证,证实获得了原生质体同核体杂交菌株 25 株,原生质体同核体与单孢同核体杂交菌株 50 株,表明茯苓原生质体同核体杂交育种的可行性.
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编辑人员丨2024/4/6
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胶质射脉革菌(Phlebia tremellosa)单核菌株的制备与单核体筛选
编辑人员丨2023/8/5
为获得胶质射脉革菌(Phlebia tremellosa)BBEL0901的单核体,本研究首先考察了溶壁酶的浓度、菌龄、酶解时间、稳渗剂浓度等因素对原生质体产量的影响,进而采用正交试验优化影响原生质体制备的关键条件,最后基于细胞核染色的方法鉴定单核菌株,基于ITS序列对单核体进行分子鉴定后采用二代测序技术对单核体的全基因组DNA进行检测.结果表明:采用马铃薯葡萄糖(PDB)加富培养基中静置培养4.5 d的菌丝,以0.65 mol/L氯化钠为稳渗剂,用5％的溶壁酶酶解3 h的原生质体产量最大;通过荧光染色和显微镜观察获得了三株单核菌株,对单核菌株M73的全基因组测序显示胶质射脉革菌的基因组为36.1 Mb,杂合度较低.本研究为胶质射脉革菌全基因组测序及基因功能的验证提供了可靠的实验材料.
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编辑人员丨2023/8/5
