[目的]探究参七虫草方对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响,探讨其干预特发性肺纤维化(IPF)炎症反应、延缓肺纤维化的机制.[方法]将140只雄性SD大鼠随机分成 5组:空白组、模型组、参七虫草方组、吡非尼酮组、精氨酸脱亚胺酶组,每组 28 只.除空白组外,其余 4 组大鼠均采用气管内滴注博来霉素(BLM)的方法建立IPF大鼠模型.空白组及模型组大鼠予 0.9%氯化钠溶液灌胃,其余 3 组分别予参七虫草方、吡非尼酮灌胃及精氨酸脱亚胺酶腹腔注射,于药物干预第7、14、21、28 天分 4批处死大鼠.苏木精-伊红(HE)、Masson染色法观察肺组织病理变化;流式细胞术分别检测各组大鼠肺组织单细胞悬液中调节性T淋巴细胞(Th)1/Th2、自然杀伤T细胞(NKT细胞)阳性率;酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)及白细胞介素-10(IL-10)的相对表达水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组大鼠肺组织中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(P-MEK)、磷酸化ERK(P-ERK)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及活化蛋白酶-1(AP-1)的相对表达水平.[结果]与模型组比较,各治疗组大鼠肺组织中炎症细胞浸润及蓝色胶原沉积均有不同程度改善,但随时间推移,肺纤维化仍逐渐进展.与空白组比较,模型组大鼠相同时间点肺组织单细胞悬液中Th1/Th2 降低(P<0.05),NKT细胞阳性率升高(P<0.01),血清中TGF-β1 表达水平上升(P<0.01),IL-10 表达水平下降(P<0.01),肺组织中P-MEK、P-ERK、NF-κB p65 及AP-1 的表达水平增加(P<0.01).与模型组比较,各治疗组大鼠相同时间点肺组织单细胞悬液中Th1/Th2 无明显差异(P>0.05),NKT细胞阳性率降低(P<0.01),血清中TGF-β1 表达水平下降(P<0.01),IL-10表达水平上升(P<0.01),肺组织中P-MEK、P-ERK、NF-κB p65 及AP-1 的表达水平降低(P<0.01).[结论]参七虫草方可能通过抑制MAPK/ERK信号通路,提高IPF模型大鼠血清中IL-10 的表达水平,降低TGF-β1的表达水平,同时下调肺组织中NF-κB p65、AP-1 的表达水平,从而减轻炎症细胞浸润及胶原沉积,改善IPF病情进展.

目的 观察参七虫草方对肺纤维化大鼠精氨酸琥珀酸盐合成酶-1(ASS1)/src酪氨酸激酶(src)/信号转导和转化激活因子3(STAT3)通路相关因子表达的影响,探讨其治疗肺纤维化的作用机制.方法 选择120只SPF级SD雄性大鼠,采用随机数字表法分为5组:空白组、模型组、参七虫草方组、吡非尼酮组、精氨酸脱亚胺酶(ADI)腹腔注射组(24只/组).除空白组以外,4组均使用一次性气管内滴注博来霉素(BLM)诱导制备特发性肺纤维化的大鼠模型.造模成功后,参七虫草组予参七虫草方汤剂(0.423 g/kg)灌胃;吡非尼酮组予溶于生理盐水的吡非尼酮胶囊粉末(10 mL·kg-1·d-1)灌胃2次;ADI腹腔注射组予以2.25 mg/(kg·d)腹腔注射,1次/3 d;空白组、模型组分别以10 mL/(kg·d)生理盐水灌胃;给药疗程28 d.于第7、14、21、28天分4批处死大鼠,分离肺组织并计算肺指数.采用苏木素-伊红、马松染色观察大鼠肺组织的组织病理学;吉姆萨染色分析BALF中不同种类的炎症细胞;采用酶联免疫吸附测定法检测血清趋化因子配体2(CCL2)、转化生长因子β1(TGF-β1)的含量;蛋白免疫印迹法测定肺组织src、p-srcTry529、STAT3、p-STAT3Try705的蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测肺组织ASS1、src、STAT3的表达水平.结果 参七虫草组、吡非尼酮组和ADI腹腔注射组各时间点中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞均低于同一时间点的模型组(P<0.05).在相同时间点,参七虫草组、吡非尼酮组和ADI腹腔注射组大鼠血清CCL2、TGF-β1水平均低于模型组(P<0.05).参七虫草组、吡非尼酮组和ADI腹腔注射组的p-srcTry529、p-STAT3Try705蛋白表达水平及肺组织ASS1、src、STAT3 mRNA均低于同一时间点的模型组(P<0.05).结论 参七虫草方可以缓解大鼠的肺纤维化程度,其机制可能通过调控ASS1/src/STAT3信号通路的活化从而缓解BLM大鼠肺纤维化的炎症反应.

目的:研究益气养阴活血法对特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)大鼠血清低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)和内皮生长抑制素(end-ostatin,ES)的影响.方法:将128只大鼠随机分为空白组、模型组、泼尼松组、参七虫草组,每组32只,采用气管滴注博来霉素方法进行IPF造模,第7、14、21、28天检测大鼠血清HIF-1α、PDGF、PEDF、ES含量.结果:造模后第7、14、21、28天,模型组、泼尼松组、参七虫草组大鼠血清HIF-1α、PDGF、PEDF、ES含量高于空白组(P＜0.01);与模型组比较,泼尼松组与参七虫草组各时间点大鼠血清HIF-1α、PDGF含量降低(P＜0.01),PEDF、ES表达升高(P＜0.01);各时间点大鼠血清各指标泼尼松组与参七虫草组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:益气养阴活血法可干预IPF大鼠肺纤维化进程,机制可能与调节血管新生相关因子从而抑制血管新生有关.

目的 观察参七虫草胶囊对肺间质纤维化模型大鼠磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-ki-nase,PI3K)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase B,Akt)信号通路的干预作用.方法 采用博莱霉素气道喷雾法复制大鼠肺间质纤维化模型.将40只大鼠随机分为空白对照组、模型组、氢化泼尼松组、参七虫草胶囊组,每组10只.酶联免疫吸附法测定各组大鼠治疗前后血清及肺组织中PI3 K/Akt水平.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠血清和肺组织中Akt及PI3K水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,参七虫草胶囊组和氢化泼尼松组大鼠血清及肺组织中Akt及PI3 K水平显著降低(P<0.05);参七虫草胶囊组大鼠血清和肺组织中Akt、PI3K水平显著低于氢化泼尼松组(P<0.05).结论 参七虫草胶囊通过抑制PI3 K/Akt信号通路的激活从而抑制肺纤维化炎症反应,延缓肺间质纤维化病程进展.

高雄山虫草Cordyceps tenuipes是一种重要的珍稀野生虫草,无性型为细脚棒束孢Isaria tenuipes.对采集的野生无性型高雄山虫草生物学特性进行了研究,采用小麦和大米为栽培基质,通过添加不同营养成分进行人工驯化和栽培条件优化,对后续提高其孢梗束产量和商业化栽培具有重要意义.试验结果表明,该虫草菌丝在固体和液体培养条件下生长所需的最佳营养组成一致,通过单因素和多因素正交试验得出菌丝在固体和液体条件下生长的最佳培养基配方为蔗糖30g/L、酵母粉15g/L、磷酸二氢钾2g/L、七水硫酸镁2g/L,最佳培养条件为温度25℃,pH 7.以小麦为培养基栽培的孢梗束生物学效率介于(45.750±6.062)％-(67.820±6.018)％,总体优于大米培养基(23.410±5.242)％-(36.880±8.812)％.以添加蚕蛹粉的小麦培养基栽培的孢梗束生物转化率最高,达67.820％,高于已有的报道.通过生物学特性分析和人工驯化条件的优化,为高雄山虫草的规模化人工栽培提供参考.

目的 探讨益气养阴活血法对特发性肺纤维化(IPF)大鼠PI3K/AKT/HIF-1α信号通路的影响.方法 将128只清洁级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、参七虫草组、泼尼松组,每组32只.空白组气管内注射生理盐水予以假手术处理,余三组均用博来霉素复制IPF模型,参七虫草组和泼尼松组予以对应的药物灌胃,空白组和模型组按生理盐水灌胃,疗程28天.各组分别于药物干预的第7、14、21和28天取材,行HE、Masson染色,并用Western blot法检测各组肺组织PI3K、AKT、HIF-1α及VEGF的蛋白表达.结果 实验IPF模型复制成功;各时间点模型组的PI3K、AKT、HIF-1α及VEGF的蛋白表达均高于空白组(P＜0.05);参七虫草组和泼尼松组的PI3K、AKT、HIF-1α及VEGF的蛋白表达均低于模型组(P＜0.05).结论 以益气养阴活血法组方的参七虫草方可能通过PI3K/AKT/HIF-1α信号通路抑制VEGF的表达来干预血管新生,从而发挥对IPF的治疗效果.

目的:观察参七虫草方对特发性肺纤维化(IPF)大鼠肺组织缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、促进磷酸肌3激酶(PI3K)、AKT mRNA的影响.方法:SPF级SD大鼠128只随机分为四组,空白组、模型组、氯沙坦组、参七虫草组,各32只.采用一次性气管滴注博来霉素的方法建立IPF大鼠模型,常规法检测四组大鼠的第7、14、21、28天体重;HE、Masson染色观察四组大鼠的第7、14、21、28天肺组织病理变化;RT-PCR检测各组大鼠肺组织第7、14、21、28天HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA的表达水平.结果:模型组、氯沙坦组及参七虫草组大鼠在镜下均有不同程度的炎性浸润、胶原纤维沉积;模型组、氯沙坦组及参七虫草组第7、14、21、28天肺组织VEGF、HIF-1α高表达,PI3K、AKT mRNA、HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA表达水平均显著高于空白组(P<0.05),且随时间推进,差异越显著;在相同时间点,氯沙坦组及参七虫草组HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA表达水平显著低于模型组(P<0.05),氯沙坦组与参七虫草组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:参七虫草方可通过抑制大鼠HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA等促血管生成因子的生成而发挥抗纤维化作用.