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分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin真核表达载体的构建及杀菌试验
编辑人员丨5天前
目的:构建分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin融合蛋白真核表达载体，通过细胞感染模型研究其在胞内对结核分枝杆菌的杀伤效果。方法:构建原核重组质粒pET32a-LysinB并诱导表达，纯化蛋白后制备多克隆抗体；构建真核重组质粒pcDNA3.1(＋)-LysinB/Holin并转染进单核巨噬细胞RAW264.7，经制备的LysinB多克隆抗体进行表达鉴定后，建立细胞感染模型并通过抗酸染色和菌落计数检测LysinB/Holin融合蛋白的杀菌效果。结果:成功制备LysinB的多克隆抗体。重组质粒pcDNA3.1(＋)-LysinB/Holin在真核细胞中有效表达LysinB/Holin融合蛋白且对细胞无明显毒性。LysinB/Holin融合蛋白可有效杀伤胞内的结核分枝杆菌。结论:重组质粒pcDNA3.1(＋)-LysinB/Holin对胞内结核分枝杆菌有较好的杀伤效果，且对细胞无明显毒性，具有治疗结核病的潜能。
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编辑人员丨5天前
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噬菌体Chy5的生物学和基因组学特征
编辑人员丨2023/8/5
目的 筛选能感染结核分枝杆菌的溶源性噬菌体,了解其生物学及遗传学信息.方法 从土壤中分离纯化噬菌体;电镜观察噬菌体形态;单斑法测定宿主谱;提取噬菌体DNA,鸟枪法随机测序.采用DNAStar软件包分析基因组成分,Glimmer3.0、GeneMark软件预测基因功能,同时做共线性分析.分离溶源菌,通过紫外线诱导试验、超免反应验证噬菌体溶源性.结果 分离到一株新的噬菌体Chy5,其头部直径(61.5±1.4) nm,尾部长度(114.1±2.1) nm,为长尾噬菌体,可感染敏感及耐药结核菌株.Chy5基因组全长51 214 bp,G+C含量63.60％,与噬菌体D29基因组最相似,有88个推定基因,含有编码整合酶和阻遏蛋白的基因以及attP位点.经紫外线诱导Chy5溶源菌可形成噬菌斑,Chy5与其溶源菌共培养会发生超免反应.结论 分离到一株新的能感染敏感及耐药结核菌的溶源性噬菌体Chy5,其基因组与噬菌体D29相似,有望应用于构建荧光报告噬菌体.
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编辑人员丨2023/8/5
