目的:建立四跨膜蛋白7自身抗体（TSPAN7A）的荧光素酶免疫共沉淀检测技术（LIPS），并评估TSPAN7A在中国1型糖尿病（T1D）人群中的应用价值。方法:将插入人全长四跨膜蛋白7 cDNA的海肾荧光素酶重组质粒转染293T细胞，获得含四跨膜蛋白7与海肾荧光素酶融合蛋白的细胞裂解液。待测血清与该细胞裂解液孵育过夜后，用蛋白A-琼脂糖沉淀免疫复合物，洗涤，加入海肾荧光素酶底物并检测荧光读数，以199名健康对照的第99百分位数作为阳性阈值。采用LIPS法检测2014至2017年中南大学湘雅二医院代谢内分泌科就诊的100例T1D患者［男64例，女36例，年龄（28±16）岁］、119例2型糖尿病（T2D）患者［男78例，女41例，年龄（47±12）岁］以及98名健康对照［男55名，女43名，年龄（28±12）岁］血清中TSPAN7A水平。同时采用放射配体法（RLA）检测谷氨酸脱羧酶自身抗体（GADA）、蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体（IA-2A）、锌转运体8自身抗体（ZnT8A）水平，初步评估TSPAN7A的临床应用价值。结果:100例T1D患者中GADA、IA-2A、ZnT8A、TSPAN7A的阳性率分别为72.0%、40.0%、29.0%、25.0%，经Bonferroni法校正后，TSPAN7A阳性率低于GADA（ P<0.001），而与IA-2A（ P=0.035）和ZnT8A比较差异无统计学意义（ P=0.630）。T1D患者TSPAN7A阳性率高于T2D的0.84%（1/119；25.0%比0.84%， P<0.001）和健康对照的1.02%（1/98；25.0%比1.02%， P<0.001）。在其他抗体基础上联合检测TSPAN7A可使T1D抗体阳性检出率由82.0%提高至85.0%。TSPAN7A阳性T1D患者与其他3种胰岛自身抗体阳性者临床特征差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:本研究成功建立了TSPAN7A的荧光素酶免疫共沉淀检测技术，TSPAN7A是中国T1D人群的一种新型胰岛抗体。

目的 预测并筛选免疫反应性较强的四跨膜蛋白超家族成员1 (transmembrane 4 L6 family member 1,TM4SF1)人类白细胞抗原A2(human leukocyte antigen A2,HLA-A2)限制性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)表位肽.方法 联合4种软件(BIMAS、SYFPEITHI、IEDB、PROPRED I)对TM4SF1的HLA-A2限制性CTL表位进行预测,并采用预培养法酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assy,ELISOPT)、直接法ELISOPT对所测得表位肽的免疫反应性进行鉴定.结果 4种不同软件共预测出10条表位多肽,对其中4条(P1、P2、P8、P10)进行免疫反应性验证.多肽活化CTL能力结果显示,预培养法ELISPOT产生斑点形成细胞(spvt forming cell,SFC)的净值T明显高于直接法ELISPOT:[(阳性对照肽:322±8 vs 169±22,P＜0.05)、(多肽P1:114±10 vs 39±7,P＜0.05)、(多肽P10:156±31 vs 52±8,P＜0.05)].单个活化CTL细胞分泌INF-γ因子的水平检测结果显示,预培养法ELISPOT产生斑点的平均大小明显大于直接法ELISPOT[(阳性对照肽:21.91±2.45 vs 13.80±1.76,P＜0.05)、(多肽P1:12.90±0.88 vs 8.31±1.40,P＜0.05)、(多肽P10:17.50±3.85 vs 11.96±0.61,P＜0.05)].表位多肽P1、P10均具有免疫原性,P10的免疫活性更高.结论 预培养法ELISPOT检测多肽的免疫反应性较直接法ELISPOT灵敏性更高,多种软件联合ELISPOT预培养法可有效筛选出免疫反应性更强的卵巢癌相关抗原TM4SF1 HLA-A2限制性CTL优势表位,其中P10的免疫活性最高.

目的 采用生物信息学方法分析多房棘球蚴四跨膜蛋白(EmTspan)的结构与抗原表位. 方法 从NCBI数据库中下载EmTspan蛋白的氨基酸序列,运用ProtParam、ProtScale、SOSUI、DNASTAR、SignalP、Cell-PLoc、SOMPA、NetPhos、Motif Scan、Phyre 2、TMHMM等生物信息学软件分析蛋白质的理化性质、亚细胞定位、跨膜区域、磷酸化和翻译后修饰位点及二、三级结构,利用ABCpred、IEDB、SYFPEITHI软件分析并预测B细胞、T细胞的抗原表位,通过MEGA-X软件构建Tspan的分子进化树. 结果 EmTspan蛋白是由236个氨基酸序列组成,分子式为C1163 H1853 N291O315S21,不稳定指数为32.77,为稳定蛋白;有4个跨膜区,定位于细胞膜;二级结构中,α螺旋占46.19％,β折叠占20.34％,β转角占8.05％,无规则卷曲占25.42％;EmTspan蛋白含有的B细胞、TCL细胞及Th细胞的抗原表位分别为7、15、8个;分子进化分析多房棘球蚴的Tspan和小口膜壳绦虫的Tspan亲缘关系较近. 结论 生物信息学预测EmTspan蛋白存在多个潜在的B细胞及T细胞表位,抗原性好,可为多房棘球蚴疫苗的研制、免疫诊断等提供理论依据.

目的 基于基因数据集和分子对接技术筛选非小细胞肺癌表皮生长因子受体(EGFR)-酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)相关基因,并观察其对EGFR-TKIs药物(阿法替尼、奥斯替尼、厄洛替尼、吉非替尼)敏感性的影响.方法 收集GEO数据库4个基因数据集中非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药细胞系、敏感细胞系的差异表达基因,获得共同差异表达基因.基于CellMiner数据库使用Pearson相关分析法分析共同差异表达基因与EGFR-TKIs半数抑制浓度(IC50)之间的相关性,初步筛选基因—药物对,采用分子对接的方法对基因—药物对进行筛选验证.结果 4个基因数据集中EGFR-TKIs敏感细胞系共同的上调基因42个,共同的下调基因14个.初步筛选出符合标准的基因—药物对共16对,其中包含7个EGFR-TKIs相关基因,分别为脂多糖诱导肿瘤坏死因子(LITAF)、黏蛋白16(MUC16)、酪氨酸激酶受体2(ERBB2)、特异性雄激素调控基因116(C1orf116)、肌盲样蛋白3(MBNL3)、脾酪氨酸激酶(SYK)、四跨膜蛋白基因(TSPAN4),其中LITAF、MUC16、ERBB2、C1orf116、MBNL3、SYK表达与EGFR-TKIs的IC50呈负相关关系(P均<0.05),TSPAN4表达与EGFR-TKIs的IC50呈正相关关系(P均<0.05).分子对接结果显示,16对基因—药物对中仅5对EGFR-TKIs关键成分与对应靶点具有良好的结合活性,分别为ERBB2-阿法替尼、ERBB2-奥斯替尼、ERBB2-厄洛替尼、MUC16-阿法替尼、MUC16-厄洛替尼、MUC16-吉非替尼.结论 非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药/敏感相关的核心基因为MUC16、ERBB2,MUC16过表达能提高阿法替尼、厄洛替尼的敏感性,ERBB2过表达能提高阿法替尼、厄洛替尼、奥斯替尼的敏感性.