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库蠓核糖体DNA内转录间隔区1序列的测定与分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 测定核糖体DNA内转录间隔区1(nuclear ribosomal DNA internal transcribed spacer 1,rDNA-ITS1)序列进行库蠓种类鉴别与系统发育分析,以探究rDNA-ITS1序列在库蠓分子鉴定和系统发育研究方面的适用性.方法 采用DNA扩增、纯化、克隆及测序的方法获得荒川库蠓Culicoides arakawai、凹缘库蠓C.holcus、连斑库蠓C.jacobsoni、印度库蠓C.indianus、霍飞库蠓C.huffi和肩宏库蠓C.humeralis等6种库蠓的rDNA-ITS1序列,基于Kimura 2-parameter公式计算种内和种间遗传距离,应用MEGA 6.06软件分析DNA序列碱基组成并以环纹埃蠓Allohelea annulata为外群构建系统发育树(邻接法和最大似然法).结果 上述6种库蠓的rDNA-ITS1序列经过Clustal W比对及人工校对和编辑后的长度为352 bp,其中T、C、A、G4种碱基的含量分别为36.8％、13.0％、30.0％和20.1％,A+T的含量(66.8％)高于C+G的含量(33.1％);K-2p遗传距离在种内和种间具显著差异(t=32.430,P＜0.05);系统发育树中不同种类库蠓各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支,其与形态学鉴定结果一致.结论 本研究证实了rDNA-ITS1序列可用于进行库蠓及其近似种的分子鉴定和系统发育分析.
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编辑人员丨2023/8/6
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云南边境地区埃蠓属一新种形态学和分子生物学鉴定
编辑人员丨2023/8/6
目的 采用形态学和分子生物学方法对在中国-老挝-越南三国交界地区采集蠓虫样本中的1种埃蠓进行系统分类鉴定.方法 2018年5月在云南省江城县中老越三国交界地区采集蠓虫样本,提取蠓虫基因组DNA,分别采用ITS-1基因和CO Ⅰ基因特异引物进行PCR扩增、序列测定.采用Clustal X2.1软件、DNAStar软件和Mega 7.0进行序列分析;同时对蠓虫进行压片,在体视显微镜下观察形态学特征,并计算AR、HR、PR、CR和TR1、TR2、TR3等数值.结果 江城采集到的1只雌性蠓虫具有两复眼相连、无毛、复眼间有一额鬃;触角15节,触须5节,第3节中部膨大有1小圆形感觉器窝;唇片鬃左右各2根,大颚端部有齿7枚,第5齿钝小.翅有2个发达径室,径2室和径1室长度之比值2.069,除翅基淡斑外,有9个淡斑,中2脉(M2)中部两侧淡斑相连,翅沿中脉有5个暗斑,除端部小暗斑外,其余4块均覆及径脉,径中横脉处暗斑扩延至翅后缘.中脉基部泡状膨大,被暗斑覆盖,第2径室(2R2)端部1/2和基部1/6被浅色暗斑覆盖.后足跗节1～3节各有1个端刺.腹部有2个球形受精囊,略不等大,有颈,另有1退化小囊等形态学特征.遗传进化分析结果显示:在ITS-1基因构建系统进化树上,江城县采集的蠓虫与环纹埃蠓形成一个进化分支,核苷酸同源性在92％～93％之间,而与其他蠓虫核苷酸同源性均低于81％;在CO Ⅰ基因构建的系统进化树上,江城采集的蠓虫位于独立进化分支内,与其他蠓虫核苷酸同源性均低于84％.结论 形态学和分子生物学鉴定结果均提示江城采集的这只蠓虫为埃蠓属1新种,丰富了我国蠓虫种类资源.
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编辑人员丨2023/8/6
