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卵裂期优质胚胎的染色体嵌合体研究
编辑人员丨1周前
目的:应用基于多次退火环状循环扩增(multiple annealing and looping-based amplification cycles，MALBAC)的单细胞测序技术分析卵裂期优质胚胎的嵌合体率及类型。方法:收集接受卵胞浆内单精子显微注射治疗并生育正常后代的夫妇捐献的卵裂期冷冻优质胚胎，解冻，消化透明带，收集卵裂球，进行单细胞全基因组扩增及二代测序。结果:共解冻胚胎23枚，收集184个卵裂球。175个(95.1%)卵裂球获得了测序结果，其中100个(57.1%)为非整倍体。在23枚胚胎中，3个(13.0%)为正常的二倍体，20个(87.0%)为嵌合体，其中包括5个(21.7%)非整倍体嵌合型、7个(30.4%)为二倍体-非整倍体嵌合型、5个(21.7%)为异常嵌合型、3个(13.0%)为无规律分离型。结论:卵裂期优质胚胎中存在较高的染色体嵌合体率。复杂染色体异常或高比例异常细胞的嵌合体可能是影响胚胎发育潜能的重要因素。
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编辑人员丨1周前
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不同单细胞全基因组扩增方法的比较及MALBAC在辅助生殖中的应用
编辑人员丨2023/8/6
单细胞全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)是指在单细胞水平对全基因组进行扩增的新技术,其原理是将分离的单个细胞的微量全基因组DNA进行扩增,获得高覆盖率的完整的基因组后进行高通量测序,用于揭示细胞异质性.目前,WGA方法主要包括引物延伸预扩增(primer extension preamplification PCR,PEP-PCR)、简并寡核苷酸引物PCR(degenerate oligonucleotide primed PCR,DOP-PCR)、多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)、多次退火环状循环扩增(multiple annealing and looping-based amplifica-tion cycles,MALBAC)等.本文对不同的单细胞WGA方法的原理及应用情况分别进行了阐述,并对其扩增效率进行评价和比较,包括基因组覆盖度、均一性、重现性、SNV(single-nucleotide variants)和CNV(copy number variants)检测力等.综合对比不同单细胞WGA方法后发现,MALBAC的扩增均一性最高、等位基因脱扣率最低、重现性最好,且对于CNV和SNV的检测效果最好.本文还阐述了MALBAC技术在人类单精子减数重组、非整倍体分析以及人类卵细胞基因组研究中的应用.
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编辑人员丨2023/8/6
