目的:探讨富含半胱氨酸型运动神经元蛋白1（CRIM1）对非小细胞肺癌（NSCLC）辐射敏感性和转移的影响及可能的机制。方法:采用短发夹RNA（shRNA）敲降NSCLC H460、H358细胞中CRIM1的表达，并将H460、H358细胞分别分为3组：H460细胞、H460-shCRIM1细胞、H460-shNC细胞和H358细胞、H358-shCRIM1细胞、H358-shNC细胞，其中shCRIM1表示用shRNA敲降CRIM1的表达，shNC表示阴性对照。采用小干扰RNA（siRNA）敲降H358细胞中CRIM1的表达，并将细胞分为2组：H358-siNC细胞和H358-siCRIM1细胞。采用细胞克隆形成实验（照射剂量为0、1、2、4 Gy）、慧星实验（照射剂量为8 Gy）和细胞免疫荧光实验（照射剂量为6、8、12 Gy）观察CRIM1对H460细胞辐射敏感性的影响。采用Transwell实验、细胞黏附实验观察CRIM1对H460、H358细胞转移的影响。构建小鼠H460原位肿瘤模型，采用组织病理学检查评估裸鼠肺内原位接种肿瘤转移情况。采用转录组学分析法探讨CRIM1影响NSCLC细胞转移的可能机制。组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:克隆形成实验结果显示，与H460-shNC细胞相比，1、2 Gy照射后H460-shCRIM1细胞的克隆形成率明显降低[1 Gy：（87.04±8.04）%对（58.01±4.39）%；2 Gy：（48.23±1.22）%对（31.43± 0.08）%]，且差异均有统计学意义（ t=4.48、19.50，均 P<0.05）。慧星实验结果显示，8 Gy照射后H460-shCRIM1细胞的olive尾距长于H460-shNC细胞，且差异有统计学意义（1.27±0.54对1.05±0.42， t=2.14， P<0.05）。细胞免疫荧光实验结果显示，H460-shCRIM1细胞受照后磷酸化组蛋白H2AX foci数多于H460-shNC细胞（6 Gy：14.33±2.81对11.00±3.92；8 Gy：34.00±11.14对21.17±6.15；12 Gy：25.80±3.96对20.17±3.31），且差异均有统计学意义（ t=2.45、5.52、2.47，均 P<0.05）。Transwell实验结果显示，H460-shCRIM1、H358-shCRIM1细胞的迁移率分别较H460-shNC、H358-shNC细胞明显升高，且差异均有统计学意义（ t=4.73、10.19，均 P<0.05）。细胞黏附实验结果显示，H460-shCRIM1、H358-shCRIM1细胞的黏附能力分别较H460-shNC、H358-shNC细胞下降，且差异均有统计学意义（ t=2.86、3.66，均 P<0.05）。组织病理学检查结果显示，原位接种H460-shCRIM1细胞的裸鼠肺内转移灶明显多于H460-shNC细胞。转录组学分析结果显示，筛选出的细胞黏附相关基因连接黏附分子2（JAM2）、连接蛋白3（NECTIN3）和紧密连接蛋白4（CLDN4）在H460-shCRIM1、H358-siCRIM1细胞中的表达均下降；并在体外实验中得到验证，其中，H460-shCRIM1细胞相较于H460-shNC细胞分别下降了86.66%、49.35%、30.27%（ t=47.52、7.47、18.98，均 P<0.05），H358-siCRIM1细胞相较于H358-siNC细胞分别下降了36.60%、31.70%、50.00%（ t=7.40、7.10、16.56，均 P<0.05）。 结论:抑制CRIM1可增强NSCLC细胞H460的辐射敏感性，CRIM1可能通过影响肿瘤细胞连接的方式影响NSCLC的转移。

目的:探讨富含半胱氨酸型运动神经元蛋白1(Crim1)在肥大心室肌细胞中的表达情况及血管紧张素Ⅱ受体1型(AT1R)对其表达的调控作用.方法:分离获取1日龄SD大鼠乳鼠的原代心室肌细胞,培养48 h后换无血清培养基,分为4组:对照组,不予其他干预,培养26 h;牵张组,培养2 h后牵张刺激24 h;氯沙坦组,氯沙坦(终浓度为10μmol/L)干预26 h;氯沙坦+牵张组,氯沙坦(终浓度为10μmol/L)预处理2 h后牵张刺激24 h.检测各组心室肌细胞蛋白/DNA比值、心室肌细胞表面积、Crim1的mRNA和蛋白表达水平.结果:牵张组心室肌细胞蛋白/DNA比值(1.83±0.15对1.16±0.07,P<0.001)、心室肌细胞面积[(591.85±180.20)μm2对(259.96±54.20)μm2,P<0.001]均明显高于对照组,氯沙坦+牵张组心室肌细胞蛋白/DNA比值(1.68±0.13对1.83±0.15,P<0.001)、心室肌细胞面积[(372.25±116.13)μm2对(591.85±180.20)μm2,P<0.001]均明显低于牵张组.牵张组Crim1的mRNA表达水平(1.14±0.38对4.27±0.11,P<0.001)、蛋白表达水平(19230.97±2205.74对37178.94±1130.57,P<0.001)均明显低于对照组,氯沙坦+牵张组Crim1的mRNA表达水平(2.24±0.44对1.14±0.38,P<0.05)、蛋白表达水平(28934.47±1897.06对19230.97±2205.74,P<0.05)均明显高于牵张组.结论:肥大心室肌细胞中Crim1表达下调,AT1R可能参与了对肥大心室肌细胞中Crim1表达的调控.

目的 探讨富含半胱氨酸型运动神经元蛋白1(CRIM1)在胃癌中的预后价值,并研究沉默CRIM1后对胃癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 应用TCGA和Kaplan-Meier plotter数据库分别分析CRIM1在胃癌中的表达情况及其与胃癌患者预后的关系.通过转染小干扰RNA(siRNA)降低CRIM1在AGS细胞中的表达并验证沉默效果.采用MTT法和流式细胞术分别验证CRIM1沉默对AGS细胞增殖和凋亡的影响.Western blotting检测AGS细胞中凋亡相关蛋白BCL-2和BAX的表达.结果 生物信息学分析结果显示,胃癌组织中CRIM1的表达明显高于正常胃组织,且CRIM1低表达的胃癌患者比高表达的胃癌患者总生存期更长(P<0.05).转染组AGS细胞的CRIM1蛋白表达量显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).沉默CRIM1后AGS细胞的增殖率降低,凋亡率升高,BCL-2蛋白的表达量下降而BAX蛋白的表达量升高(P<0.05).结论 高表达的CRIM1与胃癌患者预后不良有关,沉默CRIM1可以抑制胃癌细胞AGS增殖,并诱导其凋亡.