目的 探讨快速发育生长因子同源蛋白2 抗体(Sprouty2)蛋白调节去势抵抗性前列腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制.方法 根据试验目的将人去势抵抗性前列腺癌细胞分为Sprouty2 蛋白高表达组、阴性对照组、空白对照组.Sprouty2 蛋白高表达组通过siRNA技术将小激活RNA(saRNA)转入人去势抵抗性前列腺癌细胞中进行干预;阴性对照组通过siRNA技术将空载体质粒转入人去势抵抗性前列腺癌细胞中进行干预;空白对照组进行常规培养;取对数生长期细胞用于后续实验.噻唑蓝(MTT)测定细胞增殖情况;划痕实验测定细胞迁移能力;Annexin V-FITC和PI双染色测定细胞凋亡情况.Western blot测定 Myc促癌基因(c-Myc)、SRY盒转录因子 4(Sox4)、E-box结合同源盒 1(ZEB1)蛋白、E-钙黏蛋白、波形蛋白表达.结果 Sprouty2 蛋白免疫细胞百分比、Sprouty2 蛋白免疫细胞荧光强度在各组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05).细胞增殖活力在阴性对照组与空白对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);Sprouty2 蛋白高表达组细胞迁移率明显低于阴性对照组和空白对照组,细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01);细胞迁移率和细胞凋亡率在阴性对照组与空白对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).E-钙黏蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01);c-Myc、Sox4、ZEB1 蛋白、E-钙黏蛋白、波形蛋白表达水平在阴性对照组与空白对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 Sprouty2 蛋白高表达可能通过下调c-Myc、Sox4、ZEB1 蛋白、波形蛋白表达,上调Sprouty2 蛋白表达抑制去势抵抗性前列腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡.

目的 探讨微小RNA-21 (miR-21)对人宫颈癌Siha细胞增殖、凋亡、侵袭及调控快速发育生长因子同源蛋白2抗体(SPRY2)表达的影响.方法 收集2016年1月至2017年12月广州市番禺区中心医院收治患者的宫颈癌组织和正常宫颈组织标本各22例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(QPCR)检测宫颈癌组织中miR-21和SPRY2的表达水平.采用LipofectamineTM 2000脂质体法将miR-21模拟物(minic-21组)、模拟物对照寡核苷酸(minic-nc组)、抑制剂(inhibitor-21组)和抑制剂对照寡核苷酸(inhibitor-nc组)转染到宫颈癌Siha细胞.转染48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,QPCR和Western blot检测各组细胞中SPRY2 mRNA和蛋白水平.结果 与正常宫颈组织比较,宫颈癌组织中miR-21表达明显增高,SPRY2表达明显降低(P＜0.05),二者呈负相关(P＜0.01).与相应对照组相比,minic-21组Siha细胞增殖率升高,凋亡率降低,侵袭能力提高(P＜0.05);inhibitor-21组Siha细胞增殖率降低,凋亡率升高,侵袭能力减弱(P＜0.05).与相应对照组相比,minic-21组SPRY2蛋白水平明显降低(P＜0.05),SPRY2 mRNA水平无明显差异(P＞0.05);inhibitor-21组SPRY2 mRNA和蛋白水平均明显升高(P＜0.01).结论 miR-21在宫颈癌中可能通过调控肿瘤抑制基因SPRY2发挥作用,有望成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点.

目的 探讨转移性宫颈癌组织的旁分泌作用对肿瘤细胞扩散的影响.方法 选择22例转移性宫颈鳞癌患者的手术标本(癌组织和癌旁组织)和血清标本,以及22名健康体检者的血清标本,采用逆转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-21-5p在癌组织和癌旁组织中的表达水平;分别转染miR-21-5p模拟物/抑制剂到宫颈癌SiHa细胞,采用RT-qPCR、细胞集落形成实验、Transwell迁移实验、噻唑蓝(MTT)比色法、蛋白免疫印迹法、双荧光素酶报告分析差异;采用高速离心法提取血清外泌体;采用纳米颗粒跟踪分析(NTA)技术、蛋白免疫印迹法、透射电子显微镜(TEM)对外泌体进行表征鉴定;采用RT-qPCR检测宫颈鳞癌患者和健康体检者血清外泌体中miR-21-5p的表达差异;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清外泌体中miR-21-5p对肿瘤转移的诊断效能.结果 miR-21-5p在转移性宫颈鳞癌组织中表达上调;miR-21-5p过表达能促进宫颈鳞癌SiHa细胞集落形成以及细胞增殖与迁移(P均<0.01);双荧光素酶报告显示,miR-21-5p可以靶向快速发育生长因子同源蛋白2抗体(SPRY2),对SPYR2的表达水平进行调控;miR-21-5p模拟物转染的SiHa细胞中,磷酸化丝裂原和应激激活的蛋白激酶、磷酸化核糖体S6蛋白激酶、磷酸化原癌基因C-RAF、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激酶和磷酸化MAPK蛋白的表达均上调(P均<0.05).miR-21-5p在宫颈鳞癌患者的血清外泌体中上调(P<0.05).血清外泌体评估宫颈癌转移的ROC曲线下面积为0.9375.结论 转移性宫颈鳞癌患者组织中miR-21-5p通过外泌体传递促进肿瘤转移,其机制可能与靶向SPRY2/细胞外调节蛋白激酶/MAPK信号通路有关.